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RNAscope® HiPlex12 Ancillary kit is designed to work with RNAscope HiPlex8 Reagent Kit (PN 324100) for 12 plex fluorescent in situ hybridization. It contains RNAscope HiPlex12 Ancillary Reagents (PN 324120) and RNAscope HiPlex Cleaving Stock Solution (PN 324130). RNAscope HiPlex Image Registration Software (PN 300065) is required for adequate imaging.Sample Type Compatibility
Fixed frozen tissue, Fresh frozen tissueRNAScope Workflow
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-08-29
Rhodamine-Phalloidin/Calcofluor StainingDavid AmbergGrow 50 mls of yeast to 5x10E6. Add formadehyde to the media to 4% (33 mls. of 10%). Fix in media at temper 查看更多
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2021-08-27
DAPI Staining To visualize DNA, incubate fixed samples with 100 ng/ml 4",6"-diamidino-2-phenylindole hydrochloride (DAPI) in PBS for 30 min. Rinse 3x with PBTw 查看更多
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2021-08-31
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Dye Filling to Stain Amphid and Phasmid Neurons by Michael Koelle, from Beth Sawin 4/6/94 1. Buy DiO from Molecular Probes, catalog # D-275. DiO fluorescesces 查看更多
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2021-08-20
一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养，但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，依据其外形和生长特征可区分为以下三类：上皮细胞（E）、成纤维细胞（F）和羊水细胞（AF）。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长，所以在培养过程中的 查看更多
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2021-08-30
Steve HahnLast Modified December 1997This method works well when transforming with a plasmid and is rapid. (for highest efficiency transformation, see DMSO tra 查看更多
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2021-09-03
Purification of Gene Targeting Vector DNA for Electroporation1. Purify plasmid from bacteria.We recommend the Qiagen EndoFree Plasmid Maxi kit for the purifica 查看更多
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2021-09-17
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2021-09-07
Lysis Buffer Proteinase K25 ml 1M Tris pH 8.0 (FC 50mM) 100 mg dry Proteinase K (Sigma #2308)50 ml 0.25M EDTA (FC 25 mM) 4.75 查看更多
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2021-09-18
STAINING NONFILAMENTOUS ACTIN WITH VITAMIN-D BINDING PROTEINMaterials1. Gc-globulin (vitamin-D binding protein; Calbiochem 345802), prepare 2 mg/ml stock in PB 查看更多
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Vital Staining of Chromosomes with Hoechst 332581. Hoechst 33258, 10 mg/ml stock in DMSO. 2. Culture medium. 3. 15 ml sterile conical tube. 1. In a 15 ml conic 查看更多
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2021-08-24
Fixation and Staining ParametersAntigen Fixation Fixation time AntibodyDilutionRefmicrotubules 100% MeOH 5 min @ RT DM1a1:500actin 4% Formaldehyde* 8 min @ RT 查看更多
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常用抗体标记荧光染料的选择 实验方法123
尼玛君ekN2021-07-30
溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加， 从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多溴化乙锭，直至达到饱和( 每2个碱基对大约结合1个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。
从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。
质粒DNA纯化的试验步骤：
测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
室温下用Sorvall SS34头（或与其相当的转头）以8000rpm离心5min， 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。
用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。
以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h（VTi65 转头）、 以45 000rpm离心48h（Ti50转头）、以60 000rpm离心24h（Ti65转头）或者以60 000rpm离心24h（Ti70.1转头）。普通光照下，在梯中心可见两条DNA区带， 上部区带材料通常较少，由线状的细菌（染色体）DNA和带切口的环状质粒DNA组成：下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物，位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl－溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在，将扩展为一条宽带，并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷，可收集整个DNA区高产水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷，可收集整个DNA区带，用CsCl溶液（ρ=1.58g/ml）将体积调到15ml，在两个离心管中再度离心，使DNA达到平衡。
收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入，为尽量减少污染的机会，首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带（杂色体DNA）：用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂，然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头（其斜面向上）插入管中，以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内，用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头（18号），将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。展开
从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。
质粒DNA纯化的试验步骤：
测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
室温下用Sorvall SS34头（或与其相当的转头）以8000rpm离心5min， 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。
用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。
以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h（VTi65 转头）、 以45 000rpm离心48h（Ti50转头）、以60 000rpm离心24h（Ti65转头）或者以60 000rpm离心24h（Ti70.1转头）。普通光照下，在梯中心可见两条DNA区带， 上部区带材料通常较少，由线状的细菌（染色体）DNA和带切口的环状质粒DNA组成：下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物，位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl－溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在，将扩展为一条宽带，并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷，可收集整个DNA区高产水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷，可收集整个DNA区带，用CsCl溶液（ρ=1.58g/ml）将体积调到15ml，在两个离心管中再度离心，使DNA达到平衡。
收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入，为尽量减少污染的机会，首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带（杂色体DNA）：用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂，然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头（其斜面向上）插入管中，以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内，用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头（18号），将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。展开
荧光定量数据如何处理 分子生物 PCR相关 论坛学术...123
soundname2021-08-16
请问荧光PCR获得的数据如何处理成扩增曲线，还有标准曲线怎么做啊？有没有什么资料可参考？
分子生物学常用荧光核酸染料123
2021-08-06
荧光染料是研究生物学围观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一，楼主想要详细的了解的话，可以去专业的网站上面找找看，有空的话可以去生物帮那里查看一下。我比较喜欢去那里查找资料的。这个网站蛮专业的。我记得上面有一个介绍了分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料文档，还对荧光染料的使用提出了自己的看法。你可以参考一下啊。有时间就去那儿上面（ YINGG.www.bio1000.com/ ）找找看啊，希望可以帮到你啊
荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化123
伤逝_JaynE羣2018-01-17
碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。3. 完整细胞DNA的PI染色(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。（二）吖啶橙染色1. DNA和RNA的鉴别染色利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：1）试剂：（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P
紧急！关于realtimePCR条件如何摸索的问题？？_问答详情_蚂蚁淘,...123
2021-08-20
最近在看文献时，看到realtime－PCR做相对定量的时候，要求目标序列和内参序列的扩增效率必须相等。我现在要做一些基因的相对定量，所以有几个问题想问问主任和各位高手。
1.怎么看两个反应－即目标基因和内参基因是否具有相同的扩增效率？
2.每次PCR反应的扩增情况都有差异，多次反应的扩增效率岂不是都不一样了吗？
3.如何设计才能让相对定量更可行？
由于对定量PCR的接触不多，希望各位高手多多帮助！谢谢！
1.怎么看两个反应－即目标基因和内参基因是否具有相同的扩增效率？
2.每次PCR反应的扩增情况都有差异，多次反应的扩增效率岂不是都不一样了吗？
3.如何设计才能让相对定量更可行？
由于对定量PCR的接触不多，希望各位高手多多帮助！谢谢！
荧光定量 PCR 方法:探针法 VS 染料法?123
血刺续殇炏x2018-01-17
理想情况下毫无疑问应该是PCR扩增的指数期。
用不同荧光染料标记的抗体,分别与小鼠细胞和人细胞的细胞膜上的一种抗 ...123
kjh3499v2021-08-05
用不同荧光染料标记的抗体，分别与小鼠细胞和人细胞的细胞膜上的一种抗原结合，两类细胞则分别产生绿色荧光和红色荧光．将两类细胞融合成一个细胞时，其一半呈绿色，一半呈红色．在37℃下保温40min后，细胞上两种荧光点呈均匀分布（如图所示），试问：（1）人...
【求助】real time PCR 标准曲线结果分析 PCR技术讨论版...123
preciousun2021-07-20
【求助】关于荧光定量RQPCR中定量方法的两个求助问题!123
zhoubinbj2021-07-25
小弟就要进行荧光定量试验，所以在园子里面看了很多的资料？，真是似懂非懂，出现了很多的疑问，所以恳请各位指教一下，有些可能比较弱智，请各位不要见笑！非常感谢！
1.我知道一般缺省域值是3－15个循环荧光强度的标准方差的10倍，但是为什么公式是10×SD（6－15）？那仪器的本底荧光强度是前15个循环的荧光强度就算是baseline，那么仪器中用域值分析和用baseline分析有什么不同？域值能否改动？改动后的结果对于后续的分析有什么影响？一般什么时候需要改动？
2.所谓读板温度是不是就是每一部反应后检测荧光强度的步骤？是不是可以任意设定在某一步骤？譬如变性，退火，延伸甚至自己设定一个温度？
3.在做标准曲线的时候，对于标准品的要求是不是一般要求就是待扩增的目的片断，便于以后的扩增效率可比性？是不是这个也是购买的绝对标准品进行曲线作图的缺陷之一，虽然其绝对的定量已知？
4.在相对定量时候，如果内参和目的基因在同一管中进行扩增就是内参照法?不同管就是外参照法？是不是不太赞成内参照法，因为无法预知目的基因起始浓度，从而可能导致内参扩增效率远远大于目的基因而无法使用2-△△CT方法分析？
5.融解曲线的导出是不是在反应结束以后进行？融解曲线出现主峰异常增宽是什么原因导致？我还是不明白探针法是如何得出融解曲线的，主要是原理，因为染料法就是升高温度双链解链染料脱离？
6.如果用荧光染料方法进行试验，出现引物二具体很多，那么在NTC和加入模板的溶解曲线中dimer的峰值和模板中的峰值是否重叠？
敬请指教！非常感谢！
1.我知道一般缺省域值是3－15个循环荧光强度的标准方差的10倍，但是为什么公式是10×SD（6－15）？那仪器的本底荧光强度是前15个循环的荧光强度就算是baseline，那么仪器中用域值分析和用baseline分析有什么不同？域值能否改动？改动后的结果对于后续的分析有什么影响？一般什么时候需要改动？
2.所谓读板温度是不是就是每一部反应后检测荧光强度的步骤？是不是可以任意设定在某一步骤？譬如变性，退火，延伸甚至自己设定一个温度？
3.在做标准曲线的时候，对于标准品的要求是不是一般要求就是待扩增的目的片断，便于以后的扩增效率可比性？是不是这个也是购买的绝对标准品进行曲线作图的缺陷之一，虽然其绝对的定量已知？
4.在相对定量时候，如果内参和目的基因在同一管中进行扩增就是内参照法?不同管就是外参照法？是不是不太赞成内参照法，因为无法预知目的基因起始浓度，从而可能导致内参扩增效率远远大于目的基因而无法使用2-△△CT方法分析？
5.融解曲线的导出是不是在反应结束以后进行？融解曲线出现主峰异常增宽是什么原因导致？我还是不明白探针法是如何得出融解曲线的，主要是原理，因为染料法就是升高温度双链解链染料脱离？
6.如果用荧光染料方法进行试验，出现引物二具体很多，那么在NTC和加入模板的溶解曲线中dimer的峰值和模板中的峰值是否重叠？
敬请指教！非常感谢！
【求助】紧急求助。关于TD20/20光度计标准曲线的制作 制剂技术...123
winne_jin2021-07-24
实验一+紫外可见吸收光谱法123
皇家min2021-08-19
罗丹明B，
[求助]实时定量实验设计问题。急! PCR技术讨论版论坛123
zjl37682021-08-10
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