【求助】紧急求助!标准曲线制作
2021-07-24
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winne_jin
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第二张图如下
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yulanwang
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我想从两个方面来回答你的问题,一,你的质粒标准品在进行稀释时,你稀释的准确吗,一般是多取一点原样进行稀释以减少稀释误差;二,你用的荧光染料SYBRGREENI,此种染料可以跟所有的双链DNA结合,包括引物二聚体,包括其它的非特异性扩增,不知道你分析了你的熔解曲线了没有,看看是不是只有一个峰?建议你把你的熔解曲线的图也传上来。标准曲线好的话一般要求R^2=0.99以上呢,至少应该是两个9。
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winne_jin
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谢谢你。我是在别人实验室做的real-time,没有要到SDS的安装软件。明天我去把融解曲线拷下来,再请你看看。可能我稀释不准确,我是用TE稀释的,取1ul50ng/ul的溶液+9ulTE得到5ng/ul的溶液,再从1ul5ng/ul的溶液+9ulTE得到0.5ng/ul的溶液,以此类推,得到7个浓度的标准模板系列。是不是稀释不准确?
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