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NEB/NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix | Gene Assembly/50 reactions/E2621L
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NEB/NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix | Gene Assembly/50 reactions/E2621L
品牌 / 
NEB
货号 / 
E2621L
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NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix was developed to improve the efficiency and accuracy of DNA assembly. This method allows for seamless assembly of multiple DNA fragments, regardless of fragment length or end compatibility. This method has been used to assemble either single-stranded oligonucleotides or different sizes of DNA fragments with varied overlaps (15–30 bp). It has utility for the synthetic biology community, as well as those interested in one-step cloning of multiple fragments due to its ease of use, flexibility and simple master-mix format. The reaction includes different enzymes that work together in the same buffer (see Figure 1):
  • The exonuclease creates single-stranded 3´ overhangs that facilitate the annealing of fragments that share complementarity at one end (the overlap region)
  • The polymerase fills in gaps within each annealed fragment
  • The DNA ligase seals nicks in the assembled DNA
The end result is a double-stranded fully sealed DNA molecule that can serve as template for PCR, RCA or a variety of other molecular biology applications, including direct transformation of E coli.NEBuilder HiFi DNA Assembly kits are available in various formats: with NEB 5-alpha chemically competent cells (Cloning Kit, NEB #E5520), as a bundle with NEB 10-beta chemically competent cells (Bundle for Large Fragments, NEB #E2623) and without competent cells (Master Mix, NEB #E2621). NEB 5-alpha chemically competent cells are excellent for routineassemblies of 15 kb or less. NEB recommends NEB 10-beta Competent E. coli(High Efficiency, NEB #C3019 ) or NEB 10-beta Electrocompetent E. coli (NEB #C3020) for assemblies larger than 15 kb. If the assembled genes contain repetitive sequences, NEB Stable Competent E. coli (NEB #C3040) should be used.NEBuilder has been used in various applications, including:
  • Site-directed mutagenesis
  • Construction of an sgRNA-Cas9 expression vector | Animation
  • Assembly of linear yeast expression cassettes
To help select the best DNA assembly method for your needs, please use our Synthetic Biology/DNA Assembly Selection Chart.For help designing your primers for use with NEBuilder, please view our primer design video.
Figure 1: Not your average DNA assembly reagent
Figure 2: Overview of the NEBuilder HiFi DNA Assembly method
Figure 3: NEBuilder HiFi DNA Assembly offers improved efficiency in 4-fragment assembly reactions
Four fragments (~20 fmol) with 20 bp overlap were assembled using NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix (NEB #E2621), GeneArt® Gibson Assembly® Mix (Thermo Fisher #A46627) and In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Takara Bio USA #638947) to create a pUC19 vector. Assembly reactions were performed at 50°C for 60 min or 15 min. 2 μl of each assembled mix was transformed into NEB 5-alpha Competent E.coli (NEB #C2987) and spread on LB/Amp plates with IPTG and X-Gal. Blue colonies ( >95% of total colonies) that indicated correct assembly were counted. NEBuilder HiFi DNA Assembly Mix yields more colonies than both competitors.View additional performance data compared to GeneArt Gibson Assembly and In-Fusion Snap Assembly
This product is related to the following categories:
DNA Assembly, Cloning and Mutagenesis Kits Products
This product can be used in the following applications:
NEBuilder® HiFi DNA Assembly,
High-throughput cloning and automation solutions,
Genome Editing Applications
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蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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小鼠抗磷脂抗体(apa)elisa试剂盒使用注意事项:1.[jl40314] 小鼠抗磷脂抗体(apa)elisa试剂盒检测前,检查各种仪器,打开酶标仪,稳定20分钟左右。2.检测样本要澄清,不能含杂物,否则会直接影响结果。3.实验开始前要将试剂盒取出,室温放置30-40分钟,使各种试剂都恢复到室温,以使检测结果更为稳定。4.尽量做双标准实验,这样可以保证数据的准确性。5.底物具有毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,要避免接触。6.[jl4031... 查看更多>
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2018-11-12
作为一种通用酶,核糖核酸酶P(RNase P)是一种通用核酶,已在生命的三个王国中发现。它加工tRNA前体(pre-tRNA)的5端。RNase P是一种核糖核蛋白复合物,由单个具有催化能力的RNA组分和可变数量的蛋白组成。与仅含有一种小蛋白辅因子的细菌RNase P不同的是,古细菌RNase P和真核生物细胞核中的RNase P已进化出相当复杂的蛋白亚基:古细菌中有5种蛋白亚基,真核生物中有9~10种。这种tRNA前体加工反应可通过包括四个不同事件的动力学反应机制来加以描述:(1)R 查看更多>
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方法:1、粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。2、实验设计本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。3、酸 查看更多>
RQ 1 脱氧核糖核酸酶是由牛胰脱氧核糖核酸酶精致而成。它能降解单链或双链DNA,产生带3-OH的寡苷酸,并同时能严格保持RNA的完整性。该酶经严格检验不含RNase活性。 来源:牛胰。应用:1.选择性简介DNA-RNA混合物中的DANA;2.用DNase I印迹研究DNA和蛋白质的相互作用。单位定义:在40mM Tris-HCl,(pH7.9),10mM NaCl,6mM MgCl2,10mM CaCl2 缓冲液系统中,在37℃,10... 查看更多>
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