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NEB/PURExpress® Δ RF123 Kit/E6850S/10 reactions
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Description:
Arapidmethodforgeneexpressionanalysis,PURExpress®isanovelcell-freetranscription/translationsystemreconstitutedfromthepurifiedcomponentsnecessaryforE.colitranslation.Withminimalnucleaseandproteaseactivity,thePURExpresssystempreservestheintegrityofDNAandRNAtemplates/complexesandresultsinproteinsthatarefreeofmodificationanddegradation.Transcriptionandtranslationarecarriedoutinaone-stepreaction,andrequirethemixingofonlytwotubes.Withresultsavailableinafewhours,PURExpresssavesvaluablelaboratorytimeandisidealforhighthroughputtechnologies.PURExpressCitations
25μlreactionscontaining250ngtemplateDNAand20unitsRNaseInhibitorwereincubatedat37°Cfor2hours.2.5μlofeachreactionwasanalyzedbySDS-PAGEusinga10–20%Tris-glycinegel.Thereddotindicatestheproteinofinterest.MarkerMistheProteinLadder(NEB#P7703).
25μlreactionscontaining250ngtemplateDNA,20unitsRNaseInhibitorand2μl35S-metwereincubatedat37°Cfor2hours.2.5μlofeachreactionwasanalyzedbySDS-PAGE,thegelwasfixedfor10minutes,driedfor2hoursat80°Candexposedtox-rayfilmfor5hoursat-80°C.
KitComponents
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| RF1 (10 μl) | ||
| RF2 (10 μl) | ||
| RF3 (10 μl) | ||
| Control(DHFR)template | ||
| PURExpressSolutionA | ||
| PURExpressSolutionB | 3.3X |
Notes:
Forapositivecontrolreaction,use2μlofthesuppliedDHFRcontroltemplateand0.5μleachofthesuppliedreleasefactors.Eachkitcontainssufficientreagentsfor10x25µlreactions.Thethreereleasefactorsaresuppliedseparately,allowinguserstoperformaproteinsynthesisreaction/ribosomedisplayexperimentwith/withoutreleasefactorsoftheirchoice.ReleasefactorshavenotbeenaddedtosolutionB.Youmaystillobservetranslationalterminationatareducedleveldependingonyourapplicationandproteintemplatedesign.PURExpressDHFRControlTemplatesequencefiles:Fasta,GenBank蚂蚁淘电商平台
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2018-11-28
考点速记——基因表达调控基因表达是基因转录及翻译的过程，即基因所携带的遗传信息表现为表型的过程。基因表达产物包括蛋白质、rRNA、tRNA等，当表达产物为蛋白质时，基因表达需经历转录及翻译过程，当表达产物为rRNA、tRNA时，基因表达只需经历转录过程。（2002N29A）基因表达具有：①时间特异性（又称阶段特异性），即基因表达按一定的时间顺序发生；②空间特异性（又称细胞特异性、组织特异性），即多细胞生物个体在特定生长发育阶段，同一基因... 查看更多
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2018-09-29
近日，一项刊登在国际杂志Genome Medicine上的研究报告中，来自斯坦福大学医学院的研究人员通过研究发现，免疫细胞的基因表达或许能够有效预测机体对流感的易感性，文章中，研究者表示，表达KLRD1的自然杀伤细胞或许能作为机体对流感易感性的特殊生物标志物。 研究者Erika Bongen说道，这项研究中我们对四项独立流感挑战研究中来自全血转录组数据中的免疫细胞的比例进行了评估分析，随后对在三项队列研究中接种流感疫苗之前有症状脱落者... 查看更多
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2018-12-07
神经系统疾病会对性别产生不同的影响。例如，男孩患自闭症的几率比女孩高几倍，而多发性硬化症在女性中更为普遍。根据Nature Communications最近的一项研究，这种不平等可能取决于某些基因在男性和女性大脑中表达的差异。
一个国际科学家团队，包括在伦敦大学学院神经病学研究所工作的Daniah Trabzuni，获得沙特阿拉伯费萨尔国王专科医院和研究中心的奖学金，研究了137名美国白种人尸检后的脑和脊髓样本。研究人员发现，所有脑细胞中2.6%的基因在男性和女性中的表达方式不同。在大 查看更多
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2021-08-06
CRISPR/Cas9，RNAi等基因改造技术是最新发展起来的一种强有力的用于基因组编辑的分子生物学工具，现已广泛应用于各类动植物个体或细胞基因组的遗传学改造。为让广大从事医学、生命科学事业的人员更多的了解基因编辑实验技术方法，更高质量地完成科研任务，蚂蚁淘竭诚为您服务！基因表达调控相关技术： 1.基因过表达技术（Over expression） 2.CRISPR/Cas9 查看更多
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2018-12-26
Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha (PGC-1a) is a tissue-specific coactivator that enhances the activity of many nuclear recep 查看更多
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2018-12-01
都说熬夜对身体的损害很大，但是仍然有很多“夜猫子”不顾自己的身体健康继续熬夜。大部分人以为偶尔熬夜一次，第二天多休息会儿对健康的影响不大，可事实真的是这样吗？科学证明，“夜猫子”付出的代价远比我们所认知的还要多。Uppsala 大学的 Cedernaes 教授率领他的中国、德国和悉尼同事们对所谓“偶尔一次”的熬夜进行了深入研究，试图阐明熬夜对身体伤害的根本机制。这个研究团队的研究表明，仅仅熬夜一晚就会引发组织特异性的表观遗传、基因表达定... 查看更多
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2018-12-26
Mitogen-activated protein (MAP) kinases are important players in signal transduction pathways activated by a range of stimuli and mediate a number of physiolog 查看更多
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2018-12-14
DNA甲基化（DNA methylation）为DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。 查看更多
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2018-11-22
原核基因表达调控乳糖操纵子核心的：▪没有乳糖，基因关闭。▪有乳糖，基因被诱导开放。▪有葡萄糖时，乳糖操纵子是不表达的。结构：调节方式：阻遏蛋白的负性调节：诱导剂：别乳糖，半乳糖，IPTG;2.CAP的正性调节：两种调节方式的关系：乳糖操纵子中有2道开关：▪CAP结合到CAP位点发挥正控作用▪乳糖诱导去阻遏只有两道开关同时打开时，基因才能转录。色氨酸（trp）操纵子核心的：有色氨酸不表达，无色氨酸表达结构：结构基因是合成色氨酸的。（理解上... 查看更多
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2018-12-04
基因表达调控如何参与生物体发育，影响人体健康？这是各国科学家竞相研究的课题。近日，南开大学生命科学学院、药物化学生物学国家重点实验室龙加福教授团队的一项研究，揭示了一种影响基因表达调控的重要蛋白质复合物——Paf1复合物组装及功能调节的奥秘。这一发现为相关肿瘤的治疗和药物开发奠定了分子基础。近日，相关论文在线发表于国际知名学术期刊 《自然·通讯》上。 酵母发酵、植物开花结果、受精卵发育成熟及人的一生过程中，细胞中的基因表达在时间、... 查看更多
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2021-09-22
描述了 cDNA 芯片在人类基因表达分析中的用途。制备 cDNA 芯片的方法之一是用一个特制的打印机将扩增的 cDNA 转移至显微镜载（玻）片上。标记 cDNA 探针的制备以及与芯片的杂交也有所描述。 查看更多
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2018-12-12
近日，一项刊登在国际杂志Genome Medicine上的研究报告中，来自斯坦福大学医学院的研究人员通过研究发现，免疫细胞的基因表达或许能够有效预测机体对流感的易感性，文章中，研究者表示，表达KLRD1的自然杀伤细胞或许能作为机体对流感易感性的特殊生物标志物。 研究者Erika Bongen说道，这项研究中我们对四项独立流感挑战研究中来自全血转录组数据中的免疫细胞的比例进行了评估分析，随后对在三项队列研究中接种流... 查看更多
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...的叙述正确的是()A.基因表达包括转录和翻译两个过程,均发生在...123
qdxsugr2018-01-24
下列有关基因表达的叙述正确的是（ ）A．基因表达包括转录和翻译两个过程，均发生在细胞核中B．转录的模板是基因的一条链，翻译的模板是tRNAC．转录和翻译的原料都是氨基酸，都需要消耗能量D．转录和翻译都需要酶的催化，但酶的种类和功能不同
【求助】如何研究新的调控转录因子基因表达的基因 实验方法 丁 ...123
suiyu1219852021-07-31
我请请教一下，如何验证一个转录因子在细胞内是否表达。我将细胞抽提RNA，逆转录后扩出该转录因子的基因，是否就可以表明该转录因子在该细胞内是表达的？因为是菜鸟，很多都不懂。请各位多多指教，不胜感激。
如何在转录水平 检测某基因的表达 雨露学习互助123
乃牛自豪3032018-02-25
如何在转录水平 检测某基因的表达
1.基因丢失：体细胞分化过程必须将某些基因永久性的关闭,最简单有效的方式就是将其丢失.2.基因扩增：发育分化、环境条件的改变,对某些产物的需要量急剧增加--增加该基因的拷贝数.3、基因重排：某些基因片段改变原来的书顺序重新排列.4、甲基化修饰,脊椎动物,DNA上特定的CpG序列的C处可发生甲基化修饰.5、染色质结构的修饰.
检测目的基因是否转录通常采用分子杂交的方法。 基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。
1.基因丢失：体细胞分化过程必须将某些基因永久性的关闭,最简单有效的方式就是将其丢失.2.基因扩增：发育分化、环境条件的改变,对某些产物的需要量急剧增加--增加该基因的拷贝数.3、基因重排：某些基因片段改变原来的书顺序重新排列.4、甲基化修饰,脊椎动物,DNA上特定的CpG序列的C处可发生甲基化修饰.5、染色质结构的修饰.
检测目的基因是否转录通常采用分子杂交的方法。 基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。
DNA mRNA 蛋白质 我 也无聊啦
如何下载肝癌和癌旁组织的转录谱和表达谱,并对特定蛋白的差异转录和表 ...123
tommyhechina2017-01-21
最近导师要求做一个关于PARP家族蛋白在肝癌和癌旁组织中转录以及表达情况的初步研究，以确定目前的课题是否有很大价值。我之前一直在做湿实验，没有生信背景，所以对这个工作比较头疼。我不会编程（只有很浅薄的R基础），而且没有统计学基础，所以直接上网查找有没有可以在网上直接进行分析的网站。我一开始是上cbioportal上对肝癌的mRNA转录谱进行分析（我只会看网站上红得蓝的表达上调下调的标记，不会看zscore什么的。。。），但网站里面提供的对照是一个所谓的标准正常人。我没查到这个所谓的标准正常人是什么，而且导师说肝癌可能存在个体差异，所以要求用肝癌及其对应的癌旁组织的转录谱和表达谱进行分析。我上GEO搜索癌旁组织（paracanceroustissue），根本什么想要的结果都没有。我现在完全是一头雾水，无从下手，希望有做相关领域工作的前辈们或是做与之类似的工作的前辈们提供指导，非常感谢！
如何选择合适的转录本进行过表达研究123
zhf83822015-04-15
我刚刚开始实验遇到了一些问题，请各位帮忙想想办法：在PUBMED和UCSC网站上都找不到小鼠来源的一个基因的转录本，只有人的，但是后续实验要做干扰和过表达，我该怎么办呢？请各位想想办法，谢谢！
基因的转录与翻译 真题练习123
llllllllklove2018-02-07
转录和翻译的模板就是基因的DNA序列,也就是说有了DNA序列,才有了某一种固定的蛋白质,即蛋白质的氨基酸序列是由DNA序列决定的.
生物遗传信息的传递与表达过程中.DNA复制.转录.逆转录.翻译所用的...123
不预见2018-01-23
遗传物质的表达过程包括：转录和翻译两个过程
遗传物质的表达的产物是：蛋白质
DNA转录的产物是：mRNA
希望对你有帮助~
遗传物质的表达的产物是：蛋白质
DNA转录的产物是：mRNA
希望对你有帮助~
基因的表达量和转录本的表达量 组学大讲堂问答社区123
hi冰糖2018-03-04
不一样。
转录量和拷贝数是相等的（产生的RNA），但和表达量（蛋白质，最终产物）不同意思，只是表达的第一步，只有转录的也都同样顺利翻译成蛋白质才有同时满足的可能。
转录增加 不等于 表达增加表达增加 也不等于 转录增加成功转录 不代表 成功表达成功表达 说明 成功转录
基因表达(gene expression)是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。即表达=转录+翻译
转录量和拷贝数是相等的（产生的RNA），但和表达量（蛋白质，最终产物）不同意思，只是表达的第一步，只有转录的也都同样顺利翻译成蛋白质才有同时满足的可能。
转录增加 不等于 表达增加表达增加 也不等于 转录增加成功转录 不代表 成功表达成功表达 说明 成功转录
基因转录 123
罗特DSkn32021-07-26
在RNA聚合酶的催化下，以DNA为模板合成mRNA的过程称为转录（transcription）。在双链DNA中，作为转录模板的链称为模板链（template strand）或反义链（antisense strand）；而不作为转录模板的链称为编码链（coding strand）或有义链（sense strand），编码链与模板链互补，它与转录产物的差异仅在于DNA中的胸腺嘧啶（T）变为RNA中的尿嘧啶（U）。在含许多基因的DNA双链中，每个基因的模板链并不总是在同一条链上，亦即可作为某些基因模板链的一条链，同时也可以是另外一些基因的编码链。
转录后要进行加工，转录后的加工包括： 几乎全部的真核 mRNA 端都具“帽子”结构。虽然真核生物的mRNA的转录以嘌呤核苷酸三磷酸（pppAG或pppG）领头，但在5’端的一个核苷酸总是7-甲基鸟核苷三磷酸（m7GpppAGpNp）。mRNA 5’端的这种结构称为帽子（cap）。不同真核生物的mRNA具有不同的帽子。
mRNA的帽结构功能：①能被核糖体小亚基识别，促使mRNA和核糖体的结合；②m7Gppp结构能有效地封闭RNA 5’末端，以保护mRNA免疫5’核酸外切酶的降解，增强mRNA的稳定性。 （postranslational processing）：从核糖体上释放出来的多肽需要进一步加工修饰才能形成具有生物活性的蛋白质。翻译后的肽链加工包括肽链切断，某些氨基酸的羟基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等。真核生物在新生手肽链翻译后将甲硫氨酸裂解掉。有一类基因的翻译产物前体含有多种氨基酸顺序，可以切断为不同的蛋白质或肽，称为多蛋白质（polyprotein）。例如胰岛素（insulin）是先合成86个氨基酸的初级翻译产物，称为胰岛素原（proinsulin），胰岛素原包括A、B、C三段，经过加工，切去其中无活性的C肽段，并在A肽和B肽之间形成二硫键，这样才得到由51个氨基酸组成的有活性的胰岛素。向左转|向右转
转录后要进行加工，转录后的加工包括： 几乎全部的真核 mRNA 端都具“帽子”结构。虽然真核生物的mRNA的转录以嘌呤核苷酸三磷酸（pppAG或pppG）领头，但在5’端的一个核苷酸总是7-甲基鸟核苷三磷酸（m7GpppAGpNp）。mRNA 5’端的这种结构称为帽子（cap）。不同真核生物的mRNA具有不同的帽子。
mRNA的帽结构功能：①能被核糖体小亚基识别，促使mRNA和核糖体的结合；②m7Gppp结构能有效地封闭RNA 5’末端，以保护mRNA免疫5’核酸外切酶的降解，增强mRNA的稳定性。 （postranslational processing）：从核糖体上释放出来的多肽需要进一步加工修饰才能形成具有生物活性的蛋白质。翻译后的肽链加工包括肽链切断，某些氨基酸的羟基化、磷酸化、乙酰化、糖基化等。真核生物在新生手肽链翻译后将甲硫氨酸裂解掉。有一类基因的翻译产物前体含有多种氨基酸顺序，可以切断为不同的蛋白质或肽，称为多蛋白质（polyprotein）。例如胰岛素（insulin）是先合成86个氨基酸的初级翻译产物，称为胰岛素原（proinsulin），胰岛素原包括A、B、C三段，经过加工，切去其中无活性的C肽段，并在A肽和B肽之间形成二硫键，这样才得到由51个氨基酸组成的有活性的胰岛素。向左转|向右转
低表达的转录因子如何筛选下游基因 核酸基因技术123
xy_she2021-07-23
大家好，本人实验小白一枚，目前在寻找自己的毕业课题，有个实验问题想请教论坛里面的各位大侠。前期的实验证明某个转录因子具有抑癌作用，在正常肝脏组织中高表达，在肝癌组织中低表达，在HepG2，SMMC-7721等肝癌细胞株中缺失表达。我现在想用染色质免疫共沉淀结合高通量测序的方法筛选它的下游基因，由于在肝癌细胞株中缺失表达，我可以构建一个过表达转录因子的质粒到肝癌细胞株中做染色质免疫共沉淀吗？或者还有更好的方法筛选下游基因吗？谢谢！
翻译,基因表达调控123
爪机粉丝008B22021-07-30
这句话翻译成英文是：Genes are expressed by transcription and translation, and what controls transcription
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