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RandominsertionofR6KoriginforrescueofflankingDNAorplasmids
- InsertR6KoriginrandomlyintoanyDNAsequenceinvitro
- Skipprimerwalking-simplifySangersequencingoflargeDNAinserts
- RescueclonesinE.colihostexpressingthepirgeneproduct
- MinimizeinsertionbiaswiththehyperactiveTn5system,knownforhighestlevelofrandomness
Applications
- "Rescue"ofplasmidsoranyothercircularizedDNA(e.g.,mitochondrialDNA)thatwouldnototherwisereplicateinE.colibecausetheylackarecognizableoriginofreplicationand/oraselectableMarker.
- PreparationofDNAsequencingtemplatesfromtransposoninsertioncloneswithoutprimerwalkingoradditionalsubcloning.
- Creationofalibraryofrandomgeneknockoutsinvitrotofacilitategeneticanalysisofplasmid-encodedgenes.
TheEZ-Tn5™<R6Kγori/KAN-2>InsertionKit*facilitatesthesequencingandgeneticanalysisofplasmidsoranyothercircularizedDNAthatwouldnototherwisereplicateinE.coli.1,2ThekitisbasedupontheEZ-Tn5™<R6Kγori/KAN-2>TransposonwhichcarriestheE.coliR6Kγconditionaloriginofreplication(R6Kγori)andakanamycinresistancemarker.Asimple,one-step,2-hourinvitroreactionrandomlyinsertsthetransposonintothetargetDNA.ThenanaliquotofthereactionisusedtotransformanE.colihostexpressingthepirgeneproduct,whichisrequiredforreplicationfromtheR6Kγori.Insertionclonesareselectedonkanamycinplatesandcanbesequencedbidirectionallyusingtheprovidedprimersthatarehomologoustotheendsofthetransposon.ClonescanbemaintainedinEpicentre'sTransforMax™EC100D™pir+orTransforMax™EC100D™pir-116strains.3
 | Figure1.AplasmidcontainingtheEZ-Tn5™<R6Kγori/KAN-2>TransposoncanbemaintainedinTransforMax™EC100D™pir+cellsat~15copiespercell(Lanes1-4)orTransforMax™EC100D™pir-116cellsat~250copiespercell(Lanes5-8).ColoniesfromrandomlychosencloneswereprocessedusingtheColonyFast-Screen™Kit.A5-microliteraliquotoflysatewasloadedperlane.M,supercoiledDNAladder. |
References
- Jendrisak,J.etal.(2002)EpicentreForum9(1),14.
- Yoon,Y.andKoob,M.(2003)EpicentreForum10(2),10.
- Metcalf,W.W.etal.(1994)Gene138,1.
*Coveredbyissuedand/orpendingpatents,exclusivelylicensedorassignedtoEpicentre®(anIllumina®Company).
ORDERINFORMATION
EZ-Tn5™Transposase,EZ-Tn5™<R6Kyori/KAN-2>Transposon,EZ-Tn5™10XReactionBuffer,EZ-Tn5™10XStopSolution,ForwardandReversePrimers,ControlTargetDNA,SterileWater.蚂蚁淘电商平台
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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正品保证： 全球直采 在线追溯
蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
及时交付： 限时必达 畅选无忧
蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
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蚂蚁淘的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价； 报价单与合同可以直接在线生成或打印；就像在京东购物一样， 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购，订单详情会告诉您所有进程。
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蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-08-18
高效、低毒性siRNA转染试剂，成功转染的细胞系包括：HeLa S3, HT-1080, HT-29, CHO K1, J774, A549, BxPC3, DU145, HeLa, H1299, MCF7, MDA-MB453, hMSC, SKBR3, H9C2, NIH/3T3, COS7, 786-0, DLD-1, GM5756T, H2122, HCC193, HCT116, Huh7, IMR-32, Jurkat, MS53, PANC-1, PANC-10, SK-OV-3, SKW6. 查看更多
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2018-12-26
一、提取抗原蛋白将提取RNA途中留存的样品，加入150μl 100%酒精充分混匀，静置5min(RT), 2000×g , 4℃离心5min, 吸取上清至新管中, 加入750μl异丙醇, 混匀, 静置10min(RT), 12000×g, 4℃离心10min, 弃上清, 加入1ml 0.3mol/L盐酸胍/95%酒精 查看更多
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2016-05-12
青岛捷世康生物科技有限公司在发布的RNA转染试剂供应信息，浏览与RNA转染试剂相关的产品或在搜索更多与RNA转染试剂相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
Westernblot 实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃ 4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ 查看更多
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2016-06-05
SignaGen体外DNA、siRNA转染试剂LipoD293™、GenJet™(Ver. II)、GenJet™ Plus、LipoJet™、PepMute™及GenMute™，欢迎免费试用。官方网站：http://signagen-china.com 电话：0531-88807138 0531-85912162 QQ：727750... 查看更多
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2018-12-03
OZ Biosciences公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2016-12-08
济南思科生物科技有限公司在发布的PolyJet™体外DNA转染试剂（免费试用）供应信息，浏览与PolyJet™体外DNA转染试剂（免费试用）相关的产品或在搜索更多与PolyJet™体外DNA转染试剂（免费试用）相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。I. 所需材料： •Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI905 查看更多
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2017-03-03
货号：SL100566 查看更多
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2018-12-03
enQuire BioReagents公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2018-12-26
WESTERN BLOT PROTOCOLIn a Western blot, proteins that are separated on polyacrylamide gels on the basis of size are transferred to a membrane for detection wit 查看更多
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2021-08-08
为siNRA和质粒共转染所优化的高效、超低毒性转染试剂DharmaFECT Duo是一种全新的可高效共转染siRNA和质粒的转染试剂。而上述DharmaFECT 1,2,3和4则仅是针对siRNA单独转染的优化产品。虽然共转染siRNA和质粒进行报告基因系统研究越来越普遍，但对应的能够高效共转染siRNA和质粒的转染试剂则很匮乏；大部分的研究者依然运用传统的质粒转染试剂进行siRNA转染或者siRNA和质粒的共同转染，但是这些试剂没有经过转染条件的优化，往往对细胞活力产生很大的毒副作用。基于此，Dharm 查看更多
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商品咨询
细胞转染试剂求助 细胞技术讨论版论坛123
观哥2016-10-13
【精品推荐】转染新宠PEI 40000更高效的转染试剂 产品资讯...123
luozi992021-07-25
用jetPRIME和Lipo3000转染293T细胞,哪个效果更好?_问答详情_...123
Fy龙共雨云2017-10-03
脂质体的转染毒性是最大的，很明显，那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议，一个是减少DNA的用量，我一般做转染，对于任何细胞，只要是12孔板，一般都是用1ugDNA，这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质，和病毒感染没区别，质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白，在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白，这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡。因此你用DNA太多，本身就有细胞毒性。另外就是脂质体本身的毒性。事实上，对于293系的细胞系，最好用的是PEI这种东西。毒性小，转染效率高，一般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买，买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液，和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染。
而且直接使用自制的PEI非常便宜，在293上远比商品化的脂质体要好。
另外，如果你们实验室确实钱多，不怕花钱，建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好，而且毒性小，至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外，你说漂浮的细胞有表到GFP，那个不一定是真的GFP，很多时候
而且直接使用自制的PEI非常便宜，在293上远比商品化的脂质体要好。
另外，如果你们实验室确实钱多，不怕花钱，建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好，而且毒性小，至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外，你说漂浮的细胞有表到GFP，那个不一定是真的GFP，很多时候
RNAi及siRNA转染相关实验攻略 实验方法123
血刺果果6r2017-10-03
浇筑前应将模板内的垃圾、泥土，钢筋上的油污等杂物清除干净，并检查钢筋的水泥砂浆垫块、塑料垫块是否垫好。如使用木模板时应浇水使模板湿润。柱子模板的扫除口应在清除杂物及积水后再封闭。
转染 123
selena21122021-08-03
什么是OptiGrating,为什么用optimem培养基进行转染实验123
淡忘14262017-10-03
无血清，不含大量蛋白组分，不干扰DNA与转染试剂形成复合物；optimem培养基有利于细胞恢复健康状态：其中使用了 HEPES 和碳酸氢钠进行缓冲，并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、痕量元素和生长因子；其他因素；
【求助】转染试剂用什么好呢 细胞技术讨论版论坛123
Cloud灬2462021-07-31
FuGENE® 6，FuGENE® HD，Lipofectamine 2000这几个是用得很广泛的，其他的也有很多，根据用途来选。厚百holdbio:向左转|向右转
人肾癌786o细胞株侵袭力和迁移力的实验与研究123
孤傲gurx2017-10-03
786-o cell用什么转染试剂
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分，主要是脂多糖中的类脂A，在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率，此外会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分，主要是脂多糖中的类脂A，在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率，此外会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。
Invitrogen的王牌:Lipofectamine 2000转染试剂 实验方法123
GXMU研究生院2021-07-23
有战友对比过罗氏X-tremeGENEDNATransfectionReagent和lipofectamine3000的优劣吗？求解答
RNA转染与甲状腺炎研究123
qingwudarao2021-07-20
EntransterTM-R4000是英格恩生物（EngreenBiosystem）最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA，而且针对mRNA等长链RNA优化。由于纳米技术的应用，EntransterTM-R4000能做到高达90%的转染效率和60-90%的沉默效率，对难转染细胞和原代细胞也非常适用。
先附上一篇英格恩生物RNA转染试剂转染mir-346至Jurkat细胞研究甲状腺的文献，以供参考。
RNA转染试剂转染Mir-346至Jurkat细胞研究甲状腺.pdf(5947.72k)
Category:Textile Canton Fair Buyers List (广交会买家名录)123
毁992017-10-03
不同的转染试剂有不同要求， 生物通小编个人经验是转染试剂细胞毒性高 的要求长满一些，细胞多一些，就算死伤惨重 也还能留下多些活口，嘿嘿，对于质粒转染来 说这并非评判转染试剂好坏的标准，毕竟只要 转进去就算OK 了，但是对于RNAi 实验来说 就不同了），将siRNA 和转染试剂混合物加 入共同温育一段时间，更换培养基，再培养 24－48 小时检测mRNA 含量等等。 创新的方法是反向转染。这种方法称为 everse tr ansfection 或者neofection，和传统 转染方法相比区别在于，传统方法需要提前一 天接种铺板，培养24 小时后等细胞到一定汇 合度再加转染复合物转染；而反向转染则是不 用预先接种细胞，先加入转染试剂和siRNA 混合物在培养板上共同温育，然后再加入细胞 铺板，培养。这个方法的好处不单是可以节约 一整天的时间，而且转染效率高。
洗板机的应用范围 123
小靥79532017-10-03
厂家推荐的体积,是维持ip2000 1uL + 培养基 50uL这个比例.这个只是个参考,或者起始比列. 在实际操作当中,你可以同时试一下增高,减小这个比例.看看哪个效果最好,以后就用你试的那个比例.
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