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Discovery Antibodies/Anti-KV1.5 (KCNA5)-ATTO-550 Antibody/50 µl/APC-004-AO-50 µl
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Alternative Name Potassium voltage-gated channel subfamily A member 5
Lyophilized Powder Lyophilized Powder
This product is freeze dried. All water molecules have been removed.
Antigen Incl. Antigen Incl.
This antibody is shipped with its antigen FREE of charge!
Type: Polyclonal
Host: Rabbit
Reactivity: h, m, r
- GST fusion protein with the sequence HRETDHEEQAALKEEQGIQRRESGLDTGGQRKVSCSKASFHKTGGPLESTDSIRRGSCPLEKCHLKAKSNVDLRRSLYALCLDTSRETDL, corresponding to amino acid residues 513-602 of mouse KV1.5 (Accession Q61762). Intracellular, C-terminus.
Accession (Uniprot) Number Q61762
Gene ID 16493
Peptide confirmation Confirmed by DNA sequence and SDS-PAGE.
Homology Rat - 86/90 amino acid residues identical; rabbit - 71/90 amino acid residues identical; human - 70/90 amino acid residues identical; bovine, dog - 66/90 amino acid residues identical.
RRID AB_2040154.
Purity The serum was depleted of anti-GST antibodies by affinity chromatography on immobilized GST and then the IgG fraction was purified on immobilized antigen.
Form Lyophilized powder. Reconstituted antibody contains phosphate buffered saline (PBS), pH 7.4, 1% BSA, 5% sucrose, 0.025% NaN3.
Isotype Rabbit IgG.
Label ATTO-550. Maximum absorption 554 nm; maximum fluorescence 576 nm. The fluorescence is excited most efficiently in the 540 - 565 nm range. This label is related to the dye Rhodamine 6G and can be used with filters used to detect Rhodamine.
Storage before reconstitution The antibody ships as a lyophilized powder at room temperature. Upon arrival, it should be stored at -20°C.
Reconstitution 50 µl double distilled water (DDW).
Antibody concentration after reconstitution 1 mg/ml.
Storage after reconstitution The reconstituted solution can be stored at 4°C, protected from the light, for up to 1 week. For longer periods, small aliquots should be stored at -20°C. Avoid multiple freezing and thawing. Centrifuge all antibody preparations before use (10000 × g 5 min).
Negative control antigen storage before reconstitution Lyophilized powder can be stored intact at room temperature for 2 weeks. For longer periods, it should be stored at -20°C.
Negative control antigen reconstitution 100 μl PBS.
Negative control antigen storage after reconstitution -20°C.
Preadsorption Control 3 μg fusion protein per 1 μg antibody.
Standard quality control of each lot Western blot analysis (unlabeled antibody, #APC-004), and immunohistochemistry (labeled antibody).
Applications: if, ih
May also work in: ic*
-
Expression of KV1.5 in mouse cerebellumImmunohistochemical staining of perfusion fixed, free-floating frozen mouse brain sections using Anti-KV1.5 (KCNA5)-ATTO-550 Antibody (#APC-004-AO), (1:50), (red). Staining was detected in cerebellar Bergmann glial cells (arrows). DAPI is used as the counterstain (blue). G = granule layer, P = Purkinje layer, M = molecular layer.
Expression of KV1.5 in rat cerebellumImmunohistochemical staining of perfusion fixed, free-floating frozen rat brain sections using Anti-KV1.5 (KCNA5)-ATTO-550 Antibody (#APC-004-AO), (1:50), (red). Staining was detected in cerebellar Bergmann glial cells (arrows). DAPI is used as the counterstain (blue). G = granule layer, P = Purkinje layer, M = molecular layer.
References
- 1. Swanson, R. et al. (1990) Neuron 4, 929.
- 2. Gutman, G.A. et al. (2005) Pharmacol. Rev. 57, 473.
- 3. McGahon, M.K. et al. (2007) Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H1001.
-
KV1.5 is a mammalian voltage dependent K+ channel, homologous to the Drosophila Shaker K+ channel. KV1.5 was first cloned from the rat brain.1 Eight Shaker related genes exist in mammals constituting the KV1 subfamily of the large KV channel family of genes.2
A functional KV1 channel is either a membrane spanning homotetramer or heterotetramer, which is composed of members of the same subfamily. In addition several auxiliary subunits and intracellular proteins might interact with the channel and affect its function.
The structure of KV1.5 channel is similar to all KV channels and includes six membrane spanning helices creating a voltage sensor domain and a pore domain.2
The channel is expressed in cardiac and smooth muscle tissue (colon, aorta, stomach and pulmonary artery) as well as in neurons and kidney.2 A loss-of-function mutation in the gene encoding the channel was found in atrial fibrillation patients, stressing its role as a cardiac action potential regulator.3
The functional channel is considered transient (A-type) channel and shows prominent inactivation. Therefore, this channel activity influences the membrane potential and excitability of neurons and muscle.
KV1.5 channels are sensitive to high doses of TEA (330 mM) and low doses of 4-AP (0.27 mM), the “classical” non-selective potassium channel blockers.2
Lyophilized PowderNegative Control Antigen Included
Image & Title:
Immuno-colocalization of KV1.3 and KV1.5 in mouse cerebellumImmunohistochemical staining of mouse perfusion-fixed frozen brain sections using Anti-KV1.3 (KCNA3) (extracellular)-Biotin Antibody (#APC-101-B) (1:400), and Anti-KV1.5 (KCNA5)-ATTO-550 Antibody (#APC-004-AO), (1:60). A. KV1.3 staining (green) is detected in Bergmann glia soma and processes in the molecular layer (Mol) (arrow). B. Same section shows staining for KV1.5 (red). C. Merge of the two images suggests considerable co-localization in the soma of Bergmann glia. In the molecular layer, the distribution of KV1.5 is diffuse, unlike the discrete staining for KV1.3 in glial processes. Cell nuclei were visualized with DAPI (blue).
Last update: 08/11/2019
Anti-KV1.5 (KCNA5) Antibody (#APC-004) is a highly specific antibody directed against an epitope of the mouse protein. The antibody can be used in western blot, immunohistochemistry, immunocytochemistry, and immunoprecipitation applications. It has been designed to recognize KV1.5 from human, rat, and mouse samples.
Anti-KV1.5 (KCNA5)-ATTO-550 Antibody (#APC-004-AO) is directly labeled with an ATTO-550 fluorescent dye. ATTO dyes are characterized by strong absorption (high extinction coefficient), high fluorescence quantum yield, and high photo-stability. The ATTO-550 fluorescent label is related to the well known dye Rhodamine 6G and can be used with filters typically used to detect Rhodamine. Anti-KV1.5 (KCNA5)-ATTO-550 Antibody is especially suited for experiments requiring simultaneous labeling of different markers.
For research purposes only, not for human use
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Cy5-链霉亲和素是由西安亚博生物技术有限公司代理或销售的ABBORBIO品牌的试剂，产品来源于中国，西安亚博。西安亚博生物技术有限公司是中国最权威的Cy5-链霉亲和素试剂销售服务商之一，在西安等地方销售Cy5-链霉亲和素试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业Cy5-链霉亲和素仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的Cy5-链霉亲和素产品 查看更多
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2019-05-13
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2018-12-31
石蜡切片免疫组化实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。<p>免疫组化可应用于：（1）确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究；（2）诊断异常细胞，指导治疗。<... 查看更多
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2021-08-14
链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(avidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质，是streptomyces avidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低。... 查看更多
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2021-09-12
Solution PreparationRIPA buffer:50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% TritonX 100, 1% Na deoxycholate, 0.1% SDS, 1 mM PMSF, 1 µg/mLaprotinin, 1 µg/mL leupeptin.PBS, pH7.4:10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, 50 mM NaCl, 2.7 mM KCl1X Sample buffer:65 查看更多
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2021-08-26
北京博尔西科技有限公司在发布的核心链霉亲和素（rc-SA）Streptavidin供应信息，浏览与核心链霉亲和素（rc-SA）Streptavidin相关的产品或在搜索更多与核心链霉亲和素（rc-SA）Streptavidin相关的内容。 查看更多
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链霉亲和素与生物素相互作用介绍123
潇潇Qx2018-02-10
以生物素-链霉亲和素为配体-受体模型探讨了不同表面密度的生物素与链霉亲和素的相互作用.通过生物素修饰的功能化聚乙二醇与表面自组装的胺基官能团的反应制备了不同表面密度的生物素仿生基体,进而实现链霉亲和素在生物素修饰的固体表面的特异性吸附.结果表明,聚乙二醇的存在有效地抑制了链霉亲和素的非特异性吸附;在生物素表面密度较低时,链霉亲和素以单分子形式吸附在表面的特定区域;当生物素表面密度达到80％时,吸附的链霉亲和素达到饱和并形成均匀的单分子层.同时,研究结果也为研究单分子相互作用提供了理想的模型.
哪些公司会用到链霉亲和素,他们的用途是干啥,谢谢各位 – 960化工...123
强蓝色经典2021-07-30
这些特异的化学物质一般都是生物制剂公司或者是实验室做光化学实验用，它的作用你可以参考下面的一些属性。
链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(svidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质。
链霉亲和素(SA)是streptomyces avidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低。
一 、来源：SA 是Streptomyces avicllrdi菌培养过程中的分泌产物，主要通过2一亚氨基生物索亲和层析法提纯，1L培养液中含蛋白1 0~60mg 。
二、分子量 ：链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于 10 mol/L 数量级，这一性质常用于分子生物学用途[1]。其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。
三、比消光系数：消光系数与蛋白中Tyr含量有关， 由于SA 中Tyr的含量比AV 多，所以SA的比消光系数也较AV 为高，两者分别为E 1mg/ml=3．40和E1mg/ml=1.57。在282nm 上这两种蛋白结合生物素后并不改变其消光系数，而在233nm上，它们结合生物素后郡便其消光系数值增高，现在一般都是利用蛋白的这种吸光特点来测定它们的活性。
链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(svidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质。
链霉亲和素(SA)是streptomyces avidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低。
一 、来源：SA 是Streptomyces avicllrdi菌培养过程中的分泌产物，主要通过2一亚氨基生物索亲和层析法提纯，1L培养液中含蛋白1 0~60mg 。
二、分子量 ：链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于 10 mol/L 数量级，这一性质常用于分子生物学用途[1]。其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。
三、比消光系数：消光系数与蛋白中Tyr含量有关， 由于SA 中Tyr的含量比AV 多，所以SA的比消光系数也较AV 为高，两者分别为E 1mg/ml=3．40和E1mg/ml=1.57。在282nm 上这两种蛋白结合生物素后并不改变其消光系数，而在233nm上，它们结合生物素后郡便其消光系数值增高，现在一般都是利用蛋白的这种吸光特点来测定它们的活性。
【求助】生物素化一抗能否用来同非亲和素结合的二抗进行IHC ...123
尾状叶2021-07-22
每个亲和素能结合多少个分子的生物素() 123
677yao6vG鎲2018-02-02
亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。
ELISPOT步骤123
天之饺子2003-11-21
1预期用途
Eli-spot分析是设计用于在单细胞悬液中计数分泌细胞因子的细胞数量的方法。这个方法的优点在于只需在体外进行很少的处理从而使细胞因子产生的分析尽可能接近于体内状况。这个技术用于测定在给予一定刺激的情况下细胞因子产生细胞的数目，以及在某种处理或病理条件下的细胞因子产生细胞的数量。
2主要原理
细胞刺激后，原位产生的细胞因子被一种特异的单抗捕获，在细胞溶解后，捕获的细胞因子与第二种生物素化的检测性抗体结合，后者进一步通过与连接碱性磷酸酶的链亲和素结合被识别。PVDF包被孔的板之后与BCIP/NBT底物作用，紫色的斑点提示单个细胞产生的细胞因子。
35×96孔试剂盒的内容物
▲捕获抗体（0.52ml），置于4℃。
▲生物素化检测抗体（冻干，重悬于0.55ml水中）。
▲抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶结合物，置于4℃。
▲牛血清白蛋白（1g），置于4℃。
▲撇去的干牛奶（1g），放于室温。
▲备用底物溶液（50ml），置于4℃。
▲96孔PVDF包被板。
▲96孔PVDF-包被板
▲细胞培养基
▲CO2孵箱
▲70%乙醇
▲Tween20
▲碱性磷酸盐缓冲液
5直接或间接Eli-spot
细胞可以在抗体包被孔中直接刺激（直接）或者首先在24孔板或细颈瓶中刺激，收获，然后种于包被孔中（间接）。
方法根据：1）被分析的细胞类型；2）预期的细胞密度。如果细胞因子产生细胞的数量很少，建议用直接法实验，但是如果细胞因子产生细胞的数量很多，最好用间接的方法。无论采用直接或间接的方法，所有刺激以后的步骤是相同的。
主要步骤：
1）96孔PVDF板首先以70%乙醇处理，然后以捕获抗体包被。
2）将细胞放入抗体包被过的含有抗原/丝裂原的微孔中，在间接法中细胞被预刺激。
3）细胞用倒置平板法去除，与生物素标记的抗体共育。
4）与结合于碱性磷酸盐的链霉亲和素反应。
5）BCIP/NTB斑点形成。
◆刺激步骤：
小鼠脾细胞在PMA和lonomycin刺激下产生IFN-γ。人的IFN-γ由PBMC在PMA和lonomycin的刺激下产生。
建议步骤：
小鼠1）分离脾细胞，ficoll。间期收获细胞。用PBS洗三次，去除ficoll。2）用培养基稀释细胞（RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清）含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10（4）—5×10（4）细胞到抗体包被的PVDF包被板，在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同，根据细胞因子产生细胞的密度，优化条件。
人用培养基稀释细胞（RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清）含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10（4）—5×10（4）细胞到抗体包被的PVDF包被板，在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同，根据细胞因子产生细胞的密度，优化条件。
●试剂准备
●检测抗体用0.55ml蒸馏水溶解冻干抗体，轻轻混匀溶液并等到所有冻干抗体溶解。
●抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶用含1%BSA的PBS稀释（1/1000）
●碱性磷酸盐缓冲液（10×浓缩液）
1L溶液：80gNaCL；2gKH2PO4;14.4gNa2HPO42H2O;2gKCL，加蒸馏水至1升。检查PH在7.2-7.4之间，此溶液在用之前稀释为1×溶液。
●含2%脱脂干奶粉的PBS一块板溶0.2g干粉于10ml1×PBS。
●含1%BSA的PBS一块板溶0.2g干粉于20ml1×PBS。
●含0.1%Tween的PBS一块板溶100μlTween20于100ml1×PBS。
●70%乙醇一块板以3ml蒸馏水和7ml乙醇混匀。
★试剂保存
1）如果短时间内不用，溶解的检测抗体应分装和保存于—20℃，在这种条件下，试剂可稳定保存至少一年。
2）底物缓冲液保存于4℃。
3）链霉亲和素-碱性磷酸酶保存于4℃。
Eli-spot步骤
1PVDF包被板用100ul70%乙醇室温下处理10分钟。
2倒空孔并以100ulPBS洗3次。
3将100ul捕获抗体加到10mlPBS中，混合并分至每孔中100ul，盖上板盖，放至4℃过夜。
4倒空每孔，用100ulPBS洗一次。
5每孔加100ul含2%脱脂干牛奶的PBS，盖板，室温2小时。
6在洗涤槽上轻弹板子倒空液体，并在吸水纸上吸干。
7用PBS洗一次。
8分配每孔100ul细胞悬液（含合适的细胞数和合适的刺激物浓度），细胞可以在体外预刺激（间接Eli-spot）。盖上板，放细胞于37℃CO2孵箱，合适的时间15-20小时。（在此期间不要摇动或平移平板。）
9在洗涤槽上轻弹板子倒空液体，并在吸水纸上吸干。
10每孔加100ul含0.1%Tween20的PBS，4℃放置10分钟。
11用含0.1%Tween20的PBS洗板三次。
12每一块板，稀释100ul检测抗体到10ml含1%BSA的PBS中，每孔加100ul，封闭扳子放于37℃1小时30分钟。
13倒空扳子并用含0.1%Tween20的PBS洗三次。
14每一块板，稀释10ul链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物到10ml含1%BSA的PBS中，每孔加100ul，封闭扳子放于37℃1小时。
15倒空，用含0.1%Tween20的PBS洗三遍，反复用吸水纸吸以去尽所有残存的液体。
16每孔加100ul备用BCIP/NBT溶液。
17让反应在室温进行5-20分钟。肉眼可见小斑点形成。
18用蒸馏水洗三次。
19干燥每孔。计数斑点。注意斑点在4℃过夜后可能会变得明显，放置扳子于室温，避免直接光照。
Eli-spot分析是设计用于在单细胞悬液中计数分泌细胞因子的细胞数量的方法。这个方法的优点在于只需在体外进行很少的处理从而使细胞因子产生的分析尽可能接近于体内状况。这个技术用于测定在给予一定刺激的情况下细胞因子产生细胞的数目，以及在某种处理或病理条件下的细胞因子产生细胞的数量。
2主要原理
细胞刺激后，原位产生的细胞因子被一种特异的单抗捕获，在细胞溶解后，捕获的细胞因子与第二种生物素化的检测性抗体结合，后者进一步通过与连接碱性磷酸酶的链亲和素结合被识别。PVDF包被孔的板之后与BCIP/NBT底物作用，紫色的斑点提示单个细胞产生的细胞因子。
35×96孔试剂盒的内容物
▲捕获抗体（0.52ml），置于4℃。
▲生物素化检测抗体（冻干，重悬于0.55ml水中）。
▲抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶结合物，置于4℃。
▲牛血清白蛋白（1g），置于4℃。
▲撇去的干牛奶（1g），放于室温。
▲备用底物溶液（50ml），置于4℃。
▲96孔PVDF包被板。
▲96孔PVDF-包被板
▲细胞培养基
▲CO2孵箱
▲70%乙醇
▲Tween20
▲碱性磷酸盐缓冲液
5直接或间接Eli-spot
细胞可以在抗体包被孔中直接刺激（直接）或者首先在24孔板或细颈瓶中刺激，收获，然后种于包被孔中（间接）。
方法根据：1）被分析的细胞类型；2）预期的细胞密度。如果细胞因子产生细胞的数量很少，建议用直接法实验，但是如果细胞因子产生细胞的数量很多，最好用间接的方法。无论采用直接或间接的方法，所有刺激以后的步骤是相同的。
主要步骤：
1）96孔PVDF板首先以70%乙醇处理，然后以捕获抗体包被。
2）将细胞放入抗体包被过的含有抗原/丝裂原的微孔中，在间接法中细胞被预刺激。
3）细胞用倒置平板法去除，与生物素标记的抗体共育。
4）与结合于碱性磷酸盐的链霉亲和素反应。
5）BCIP/NTB斑点形成。
◆刺激步骤：
小鼠脾细胞在PMA和lonomycin刺激下产生IFN-γ。人的IFN-γ由PBMC在PMA和lonomycin的刺激下产生。
建议步骤：
小鼠1）分离脾细胞，ficoll。间期收获细胞。用PBS洗三次，去除ficoll。2）用培养基稀释细胞（RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清）含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10（4）—5×10（4）细胞到抗体包被的PVDF包被板，在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同，根据细胞因子产生细胞的密度，优化条件。
人用培养基稀释细胞（RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清）含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10（4）—5×10（4）细胞到抗体包被的PVDF包被板，在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同，根据细胞因子产生细胞的密度，优化条件。
●试剂准备
●检测抗体用0.55ml蒸馏水溶解冻干抗体，轻轻混匀溶液并等到所有冻干抗体溶解。
●抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶用含1%BSA的PBS稀释（1/1000）
●碱性磷酸盐缓冲液（10×浓缩液）
1L溶液：80gNaCL；2gKH2PO4;14.4gNa2HPO42H2O;2gKCL，加蒸馏水至1升。检查PH在7.2-7.4之间，此溶液在用之前稀释为1×溶液。
●含2%脱脂干奶粉的PBS一块板溶0.2g干粉于10ml1×PBS。
●含1%BSA的PBS一块板溶0.2g干粉于20ml1×PBS。
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●70%乙醇一块板以3ml蒸馏水和7ml乙醇混匀。
★试剂保存
1）如果短时间内不用，溶解的检测抗体应分装和保存于—20℃，在这种条件下，试剂可稳定保存至少一年。
2）底物缓冲液保存于4℃。
3）链霉亲和素-碱性磷酸酶保存于4℃。
Eli-spot步骤
1PVDF包被板用100ul70%乙醇室温下处理10分钟。
2倒空孔并以100ulPBS洗3次。
3将100ul捕获抗体加到10mlPBS中，混合并分至每孔中100ul，盖上板盖，放至4℃过夜。
4倒空每孔，用100ulPBS洗一次。
5每孔加100ul含2%脱脂干牛奶的PBS，盖板，室温2小时。
6在洗涤槽上轻弹板子倒空液体，并在吸水纸上吸干。
7用PBS洗一次。
8分配每孔100ul细胞悬液（含合适的细胞数和合适的刺激物浓度），细胞可以在体外预刺激（间接Eli-spot）。盖上板，放细胞于37℃CO2孵箱，合适的时间15-20小时。（在此期间不要摇动或平移平板。）
9在洗涤槽上轻弹板子倒空液体，并在吸水纸上吸干。
10每孔加100ul含0.1%Tween20的PBS，4℃放置10分钟。
11用含0.1%Tween20的PBS洗板三次。
12每一块板，稀释100ul检测抗体到10ml含1%BSA的PBS中，每孔加100ul，封闭扳子放于37℃1小时30分钟。
13倒空扳子并用含0.1%Tween20的PBS洗三次。
14每一块板，稀释10ul链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物到10ml含1%BSA的PBS中，每孔加100ul，封闭扳子放于37℃1小时。
15倒空，用含0.1%Tween20的PBS洗三遍，反复用吸水纸吸以去尽所有残存的液体。
16每孔加100ul备用BCIP/NBT溶液。
17让反应在室温进行5-20分钟。肉眼可见小斑点形成。
18用蒸馏水洗三次。
19干燥每孔。计数斑点。注意斑点在4℃过夜后可能会变得明显，放置扳子于室温，避免直接光照。
表面接触皿(TSA+青霉素酶)_123
你让我们感动2018-01-18
有没有高手知道如何在塑料板上或者玻璃上修饰链霉亲和素，先谢谢了！
亲和素生物素系统加热到95度会分离吗 123
迷失00642021-07-29
亲和素生物素系统加热到95度会分离
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
BAS用于检测的基本方法可分为三大类。
第一类是标记亲和素连接生物化大分子反应体系，称BA法，或标记亲和素生物素法(LAB)。
第二类以亲和素两端分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素，称为桥联亲和素-生物素法(BRAB)。
第三类是将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，再与生物素化的抗抗体接触时，将抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体，称为ABC法。这一方法可以将微量抗原的信号放大成千上万倍，以便于检测。 亲和层析是将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
生物素-亲和素系统可以与亲和层析的方法结合，大大提高纯化蛋白质的纯度，或者为已知配体寻找受体。步骤是首先将生物素共价结合到配体蛋白上，再将生物素化后的配体蛋白加入含有受体蛋白的混合物，然后将此混合物通过预先固定了亲和素的层析柱，这时配体受体复合物就通过生物素-亲和素系统停留在层析柱上，最后通过选择性洗脱获得此受体配体蛋白复合物或者仅有受体。这一方法被广泛运用于药物研发行业，当人们发现某种药物分子具有疗效但是又不清楚它具体作用于哪种蛋白质时，可以将其生物素化然后把靶蛋白从成千上万种蛋白质中“抓”出来。
生物素-亲和素系统还可以用相似的方法分离DNA.方法是在DNA探针的一端挂上生物素，然后用其获得目的DNA片段，再利用固定化的亲和素回收这些DNA。
传统的基因探针是由带放射性的磷酸碱基合成的，我们可以用被生物素标记的磷酸碱基合成基因探针，避免了实验过程中放射性物质可能造成的伤害。
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
BAS用于检测的基本方法可分为三大类。
第一类是标记亲和素连接生物化大分子反应体系，称BA法，或标记亲和素生物素法(LAB)。
第二类以亲和素两端分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素，称为桥联亲和素-生物素法(BRAB)。
第三类是将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，再与生物素化的抗抗体接触时，将抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体，称为ABC法。这一方法可以将微量抗原的信号放大成千上万倍，以便于检测。 亲和层析是将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
生物素-亲和素系统可以与亲和层析的方法结合，大大提高纯化蛋白质的纯度，或者为已知配体寻找受体。步骤是首先将生物素共价结合到配体蛋白上，再将生物素化后的配体蛋白加入含有受体蛋白的混合物，然后将此混合物通过预先固定了亲和素的层析柱，这时配体受体复合物就通过生物素-亲和素系统停留在层析柱上，最后通过选择性洗脱获得此受体配体蛋白复合物或者仅有受体。这一方法被广泛运用于药物研发行业，当人们发现某种药物分子具有疗效但是又不清楚它具体作用于哪种蛋白质时，可以将其生物素化然后把靶蛋白从成千上万种蛋白质中“抓”出来。
生物素-亲和素系统还可以用相似的方法分离DNA.方法是在DNA探针的一端挂上生物素，然后用其获得目的DNA片段，再利用固定化的亲和素回收这些DNA。
传统的基因探针是由带放射性的磷酸碱基合成的，我们可以用被生物素标记的磷酸碱基合成基因探针，避免了实验过程中放射性物质可能造成的伤害。
【求助】关于ELISPOT 实验室建设与采购讨论版123
llqq2021-08-05
我马上就要就要做了，但是对此技术还是不很了解。
请各位不吝赐教。或介绍一些此方面比较好的paper和review
谢谢！
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谢谢！
人绒毛膜促性腺激素值是多少可以做b超_孕育常识_亲子宝典库...123
舞动装甲丶eq2018-02-06
链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和C端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。向左转|向右转
一种无抗鸡饲料天眼查123
兮兮妞DSPX2018-02-06
过生物素标记的流式抗体及链霉亲和素标记的荧光素
抽血检测，一般用三代酶联合免疫法 酶联免疫法，简称ELISA。 它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。 步骤：ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，然后取血清（这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因，其实是误会）。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内）。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲，如果第一次检测为阳性的话，无论是哪个实验室，必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测，第二次的方法必须与第一次的不同，如还是阳性，将送确认实验室确认。有的医院很不负责，将初筛阳性的报告发出后就不管了，这是不对的。必须经过确认实验室确认后才可出阳性诊断。祝大家。PS，第一次检测为阳性的话，一定要去确认实验室再做一次，勇敢的去面对，也许结果就不一样了。 基本原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
抽血检测，一般用三代酶联合免疫法 酶联免疫法，简称ELISA。 它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。 步骤：ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，然后取血清（这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因，其实是误会）。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内）。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲，如果第一次检测为阳性的话，无论是哪个实验室，必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测，第二次的方法必须与第一次的不同，如还是阳性，将送确认实验室确认。有的医院很不负责，将初筛阳性的报告发出后就不管了，这是不对的。必须经过确认实验室确认后才可出阳性诊断。祝大家。PS，第一次检测为阳性的话，一定要去确认实验室再做一次，勇敢的去面对，也许结果就不一样了。 基本原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
生物素亲和素系统要注意什么问题– 960问答123
列漥疛咱竂鶇2018-02-11
灵敏度
生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性
亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。
普适性
生物素-结合素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法。例如对于某待测分子，已经得到了对于该分子的生物素标记抗原，那么配合结合亲和素的胶体金可以在电镜下观测，配合结合荧光标记的亲和素可以使用流式细胞仪筛选，配合连接到酶的亲和素可以进行ELISA等免疫组化实验。
生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性
亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。
普适性
生物素-结合素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法。例如对于某待测分子，已经得到了对于该分子的生物素标记抗原，那么配合结合亲和素的胶体金可以在电镜下观测，配合结合荧光标记的亲和素可以使用流式细胞仪筛选，配合连接到酶的亲和素可以进行ELISA等免疫组化实验。
生物素亲合素系统 123
求妹纸2452021-07-21
生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244．31Da．生物素分子有两个环状结构（如图），其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；II环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联，包括蛋白质，核酸，多糖，脂类等。
亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用，亲和常数（K）为1015mol/L，比抗原与抗体间的亲和力（K=10.5～11L/mol）至少高1万倍。并且，二者的结合稳定性好专一性强，不受试剂浓度，PH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此，BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。
亲和素由于带有一个糖链侧链，导致容易和细胞表面的多糖发生非特异性亲和。因此，链霉亲和素被开发出来。
链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素，并且不带任何糖基，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015mol/L。链霉亲和素的适用范围比亲和素更为广泛。向左转|向右转
亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用，亲和常数（K）为1015mol/L，比抗原与抗体间的亲和力（K=10.5～11L/mol）至少高1万倍。并且，二者的结合稳定性好专一性强，不受试剂浓度，PH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此，BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。
亲和素由于带有一个糖链侧链，导致容易和细胞表面的多糖发生非特异性亲和。因此，链霉亲和素被开发出来。
链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素，并且不带任何糖基，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015mol/L。链霉亲和素的适用范围比亲和素更为广泛。向左转|向右转
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