WesternBlottingHRPSubstrate
lumigenECLExtra(TMA-3)isaproprietaryacridanbasedchemiluminescentsubstrateforhighlysensitivedetectionofWesternblottedandELISAcapturedproteinsthatareboundtohorserADIshperoxidase(HRP)labeledantibodies.
- Veryrapidonsetofchemiluminescence-imagescanberecordedinseconds
- Excellentsensitivity-lowpicogramtomidfemtogram
- Reducedantibodyusage-morethan10-foldreductionintheusageofexpensiveantibodyconjugates
- Temperatureinsensitive-analyticalresultsareinsensitivetotemperaturesfrom22°C-35°Creducingtheneedforprecisetemperaturecontrol
- Sustainedsignalduration -overseveralhoursallowsconvenientimaging
StableWorkingSolution
AsignificantfeatureofLumigenECLExtraisitsexcellentstABIlity.Unlikemostotherchemiluminescentperoxidasesubstrates,theworkingsolutionisstableatroomtemperatureforatleastoneweekandat2-8°Cforatleastonemonth.Withthisstability,theworkingsolutioncanbepreparedandstoredforlateruse.
RapidPeakIntensity
ReactionofthesubstratewithHRPenzymegeneratesrapidluminescenceofveryhighintensitywithinseconds.Peakintensityoflightemissionoccursat440nm.
ProductSpecifications
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1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西。
2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的。WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了。然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来。如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的。
当然做都是可以做,需要带上阴性和阳性的对照组,以区别出是抗体制备的问题还是抗原决定簇被破坏的问题。
第一,血清成分复杂,最好用密理博的Montage Albumin Deplete Kit去除血清里50%的白蛋白
第二,磷酸化蛋白提取蛋白的时候,最好加入原钒酸钠,和磷酸酶抑制剂,防止蛋白脱磷酸化。
第三,不要用牛奶做封闭剂,用BSA。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白,防止非特异带。
第四,如果条带杂带多,而且,条带弱,可以选择millipore的signal boost,增加条带特异性,而且,增强条带的亮度。