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Signalchem/Stem Cell Factor (KITLG)/10 ug/S816-40N-10
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Signalchem/Stem Cell Factor (KITLG)/10 ug/S816-40N-10
品牌 / 
Signalchem
货号 / 
S816-40N-10
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Overview:

SCF is a stromal cell-derived cytokine synthesized by fibroblasts and other cell types. SCF promotes proliferation and early differentiation of cells at the level of multipotent stem cells. It has been suggested that SCF is essential for optimal production of various hematopoietic lineages, mainly because of its ability to prevent apoptosis when co-stimulated with other cytokines. The receptor for SCF, designated SCFR (CD117) is the oncogene designated as KIT. The biological activities of SCF are considerably synergised by colony stimulating factors; GM-CSF and G-CSF, and by IL7, EPO and some other growth and differentiation factors. In combination with IL7, SCF stimulates the proliferation of pre-B cells. SCF is also a potent chemoattractant for cells expressing the kit receptor. Recombinant Human SCF is a monomeric protein that contains intra-chain disulfide bonds.

Genbank Number:

P21583

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1. Dilute 2 ml of 4000 U/ml Collagenase D as follows: 1 ml into 9 ml HBSS/Ca++/Mg++ (=400U/ml) and 1 ml into 39 ml HBSS/Ca++/Mg++ (=100U/ml). Put on ice. 2. Pl 查看更多>
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You can test whether or not you have gotten an immune response to the peptide and how strong that immune response is by doing ELISAs against peptide conjugated 查看更多>
This protocol describes a procedure for isolating human peripheral blood mononuclear cells (lymphocytes and monocytes) from a Buffy Coat (obtained from a blood 查看更多>
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最常用的的就是荧光标记的抗体,各种荧光染料。还有其他固定,通透细胞膜的试剂。

荧光标记物常用的有几十种,比如FITC, PE等等,各个生产厂家还有自己的专利产品
在买免疫组化一抗试剂的时候发现有的前面标注有“重组”二字,有的没有,请问有什么区别?买哪一种比较好?

DIG-DNA标记与检测

一、探针DNA标记方法

步骤 :
1.10ng~3ugDNA每管,双蒸水定量至总体积15ul
2.沸水水浴10分钟后迅速冰浴
3.加入 5号试剂 2ul , 6号试剂 2ul ,7号试剂 1ul
4.37度1小时~20小时
5.中止反应 加2ul 0.2M EDTA (pH 8.0) 和/或 65度 水浴 10分钟

二、标记效率检测
(一) 试剂配置
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)

TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0

Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque

Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution 1:10in Maleic acid buffer.

Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.

Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!

(二)对照的标记DNA(4号试剂)系列稀释

(三)步骤
1、取以上制备的管2~9各1ul,以及自己标记的探针1ul,点到一小片尼龙膜
2、通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、膜置塑料盒中加Maleic acid buffer 20ml ,15~25度轻摇孵育2分钟
4、10ml Blocking solution 孵育30分钟
5、10ml Antibody solution 孵育30分钟
6、10ml Washing buffer 洗2次,每次15分钟
7、10ml Detection buffer中平衡2~5分钟
8、膜在2ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间避免摇动
9、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水洗5分钟

蛋白酶K预处理
三、样品检测与杂交
(一) 步骤
1、 稀释供试品及阳性对照DNA,点膜
2、 通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、 将标记好的探针稀释到约25ng/ml, 煮沸5分钟后迅速冰浴
4、膜放入预热好的预杂交液(3.5ml/100cm2)中,充分混匀,避免起泡
5、倒掉预杂交液,加入杂交液及已变性的探针。杂交温度下至少孵育6小时

四、洗膜
1、2 × SSC, 0.1% SDS , 15-25° C,洗膜2次,每次5分钟。
2、0.5× SSC, 0.1% SDS ,预热至65~68° C,洗膜2次,每次5分钟

五、结果检测
(一) 试剂配制
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)

TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque

Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution1:10in Maleic acid buffer.

Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.

Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!

(二) 步骤
1、Washing buffer洗膜1~5分钟
2、100ml Blocking solution 孵育30分钟
3、20ml Antibody solution 孵育30分钟
4、100ml Washing buffer 洗2次,每次15分钟
5、20ml Detection buffer中平衡2~5分钟
6、膜在10ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间摇动
7、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水50ml洗5分钟展开
SFDA批准过VEGF作为肿瘤标记物检测试剂盒进行癌症检测,但是VEGF并不是特性的标记物,存在假阳性。
那为什么SFDA不批准CA199CEAAFP等检测试剂盒作为癌症检测的手段呢?
elisa试剂盒的组成结构 123
未成年QI062021-08-09
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测  试剂盒成分  1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T  2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1  3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2   4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1  5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1  6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1  7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1  8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)向左转|向右转
在盛放浓硫酸的试剂瓶的标签上应印有下列警示标记的是(  )A.B.C.D.
不同,二抗要与一抗结合,一抗与样品结合,结构当然不同。
在弱碱性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯作用,生成稳定的黄色2,4-二硝基苯氨基酸。该反应由F. Sanger首先发现,所以此反应又称桑格反应(Sanger reaction),2,4-二硝基氟苯被称为Sanger试剂。
在弱碱性(pH 8~9)、暗处、室温或40℃条件下,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯(缩写为FDNB或DNFB)反应,生成黄色的2,4-二硝基苯氨基酸(dinitrophenyl amino acid,简称DNP-氨基酸)。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应,生成一种二硝基苯肽(DNP-肽)。由于硝基苯与氨基结合牢固,不易被水解,因此当DNP-多肽被酸水解时,所有肽键均被水解,只有N-末端氨基酸仍连在DNP上,所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析,再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。
用DIG-PCR探针标记试剂盒标记探针,质粒PCR扩增后胶回收产物做模板,待标记探针片断长约600bp,反应体系如下:
探针
ddH2O36.25ul
buffer(瓶3)5ul
核苷酸混合液(含DIG-dUTP)(瓶2)2.5ul
dNTPStockSolution(瓶4)2.5ul
引物F1ul(10pmol/ul)
R1ul(10pmol/ul)
酶(瓶1)0.75ul
DNA1ul(100pg)

程序:35个循环,退火温度55度。

第一次通过探针标记得到了相应的PCR标记产物,亮度和对照相当,片段大小比标记的探针模板大,证明整个过程应该没有问题。

但一个月后重新用相同的体系,相同的程序,只是探针模板的量不同却什么都扩不出来。不知道问题出在哪了!
普鲁卡因胺123
iamasweetgirl2021-08-07
Ludger普鲁卡因胺标记试剂盒ProZyme普鲁卡因胺标记试剂)和WatersRapiFluor(WatersN-糖分析试剂盒)相比有什么不同?
TRANSFERRIN_实验搜索123
liuhua2018-03-29
罗氏公司的地高辛试剂盒NBT/BCIP
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