SBI’s first generation Cas9 vector places hspCas9 under the control of the PGK promoter and is now available as a circular plasmid
All-in-one PGK-hspCas9-H1-gRNA circular SmartNuclease vector
SystemBiosciences，简称SBI，美国加利福尼亚湾区新成立的生技公司，致力于独特，创新生物技术之开发，以研发利于基因及蛋白质功能鉴定，研究之崭新方法和工具为宗旨。
美国SBI代理SystemBiosciences,简称SBI，美国加州湾区新成立的生技公司，致力于独特、创新生物技术之开发，以研发利于基因及蛋白质功能鉴定、研究之崭新方法和工具为宗旨。现阶段研发重心为RNA干扰（RNAi）研究之相关工具。
现阶段研发重心为RNA干扰（RNAi）的研究之相关工具。系统Biosciences公司（SBI）致力于开发独特，革新的技术，为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具.SBI是专业的慢病毒产品公司，提供基于慢病毒的所有相关产品，质粒，试剂盒及相关配套试剂和慢病毒扩展产品，如IPS细胞多功能性诱导试剂盒和RNAi筛选文库。System Biosciences继续创造新的独特产品以及改善我们完善的产品线。我们对提供领先技术的承诺与我们所有研究试剂和研究项目服务的高质量制造和质量控制相匹配。 2009年要寻找的东西：以下是即将推出的新产品。新型miRZips™：基于慢病毒载体的新型技术可永久敲低MicroRNA。双标记shRNA表达载体：SBI将发布新的功能强大的shRNA表达慢病毒载体pGreenPuro™，以便为稳定的RNAi实验选择稳定转导的细胞的GFP和Puro标记。甾醇反应pGreenFire™慢病毒报告子：基于慢病毒载体的转录报告子，用于监测与固醇感应转录因子相关的转录网络活性-心血管疾病途径的关键。诱导型表达慢载体：新的构建体将允许CDNA，shRNA和microRNA的“按需”表达。2007–2008年的新产品新的miR-SNaRE：MicroRNA小型非编码RNA富集系统，该系统使用带有表位标签的microRNA加工因子来提取蛋白质及其相关RNA。识别驱动RISC复合体的信使RNA。新的GeneNet™聚焦的shRNA库：这些聚焦的shRNA库编码一组针对所有与人类激酶，磷酸酶或细胞凋亡相关基因有关的特定功能或类别基因设计的shRNA集合。这些文库可进行有针对性的高通量RNAi筛选。新的miRNomeMicroRNA分析仪：qPCR阵列在预先格式化的板中包括microRNA分析，可用于人类的完全互补或小鼠单个microRNA的完全互补，每块板上带有三个内源参考RNA对照。所有基于SangermiRBasemicroRNA数据库的microRNA分析均已注册。新的Lenti-miR™MicroRNA前体克隆：在基于HIV的慢病毒载体中可获得更多的microRNA前体集合。超过580个单独的microRNA前体克隆可用阵列形式或合并的慢病毒形式用于HT筛选。新的基于慢病毒的干细胞报道者：SBI越来越多的慢病毒载体已被开发为将基因构建体在体内外几乎传递给任何细胞类型的最有效方法。SBI已将我们的慢病毒构建体系列扩展为干细胞报道分子。使用连接到GFP报告基因的细胞和途径特异性启动子，轻松创建转基因细胞系以监测细胞分化。QuantiMir™RT试剂盒：这项流行的新技术可通过一次cDNA合成同时进行实时qPCR定量分析数百种microRNA。设计您自己的microRNA测定法以进行创新性实验。癌症microRNAqPCR分析小组（OncoMir系列）：预格式化的microRNA分析小组，用于评估95种已知与癌症有关的microRNA。干细胞microRNA分析小组：介绍了95种参与干细胞分化的microRNA，可同时监测干细胞的自我维持，造血途径和神经分化。SBI完善的产品线FullSpectrum™完整信使RNA扩增试剂盒：利用针对mRNA最常见基序的mRNA特异性引物提供完整的mRNA转录物（5"和3"末端）的无偏见，完整代表。GeneNet™siRNA库：全基因组，即用型，预包装的慢病毒库为筛选与生物学反应相关的基因功能提供了令人兴奋的机会。干扰素反应检测试剂盒：区分真正的RNA干扰和压力相关的细胞反应。PathNet™转录报告基因慢病毒载体：一种独特的方法，可创建各种稳定的报告基因细胞系，用于信号通路的研究。我们感谢您过去的支持，并期待为您提供最佳的新试剂，技术和服务，以加速您成功的研究目标。
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将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠，2天后，取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图，图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg，后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。
根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA（作用于LaminA/C）和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织，分离RNA，用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果，图5为各器官分别局部注射结果。
英格恩生物体内转染试剂，3天可完成动物体内转染实验，让动物干扰，基因敲除实验变得简单、快速有效！
近期，北京大学基础医学院鲁凤民教授课题组与许中伟、夏宁邵教授等合作，在《Theranostics》杂志上在线发表了题为“ThegRNA-miRNA-gRNAternarycassettecombiningCRISPR/Cas9withRNAiapproachstronglyinhibitshepatitisBvirusreplication”的研究论文。该研究通过模拟microRNA（miRNA）的生成过程，整合双gRNA导向的CRISPR/Cas9和RNA干扰技术，高效破坏乙型肝炎病毒（HBV）的复制模板-共价闭合环状DNA（ccCDNA），探索病毒清除新路径。北医王杰讲师、陈然和张瑞阳博士研究生为该论文的共同第一作者。
目前，我国仍有慢性HBV感染者约7800万人，慢乙肝患者约2800万人。HBV感染仍是我国病毒性肝炎、肝硬化及肝癌的重要致病因素。作为HBV复制模板的cccDNA，由于其半衰期相对较长，加上cccDNA池的不断补充，使得细胞核内的cccDNA持续存在、感染慢性化。目前，临床上治疗慢乙肝的常用药物为核苷（酸）类似物和长效干扰素，二者均不直接作用于cccDNA，难以有效清除病毒实现临床治愈。因此，研发直接靶向cccDNA的药物，寻找清除cccDNA的新方法和新策略，是当前慢乙肝治疗药物研发的热点。
该研究以miRNA-31为基本骨架，通过模拟其核心序列的二级结构设计HBV特异的miRNA（miR-HBV），miRNA两侧侧翼序列为特异性靶向cccDNA不同位点的引导RNA（gRNA）。如图所示，该gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联体表达体系导入细胞后，在细胞核内转录形成gRNA-(miR-HBV)-gRNA长转录本，经内源的Drosha/DGCR8复合体剪切，形成2个gRNA和1个miR-HBV前体（pre-miR-HBV）。进入细胞质后，pre-miR-HBV进一步经Dicer酶剪切，形成成熟的miR-HBV。一方面双gRNA导向的CRISPR/Cas9系统通过切割并去除cccDNA的关键调控和编码序列直接破坏cccDNA，另一方面通过miR-HBV在转录后水平抑制HBV复制，进而抑制cccDNA池的补充，协同促进HBVcccDNA的清除。此外，本研究还发现，当pri-miRNA-31的侧翼序列长度为38bp时与双gRNA组成的三联体对HBV复制的抑制效率最高。
双gRNA导向的CRISPR/Cas9整合RNAi技术高效抑制HBV复制模式图
当然，该技术离临床应用尚有较远的距离。一方面如何高效和靶向性地将三联体递送到HBV感染的肝细胞内是需要攻克的一大障碍；另一方面，CRISPR/Cas9基因编辑技术的脱靶效应也有安全性之虞。然而，近年来随着Cas核酸酶的不断改造，其脱靶效应得到了有效控制，安全性大为提高。而且，随着金黄色葡萄球菌Cas9的发现，使得CRISPR/Cas9系统可以装入腺相关病毒载体中，致使该技术应用于临床的距离逐渐缩短。
总之，本研究通过gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联表达框架联合CRISPR/Cas9和RNA干扰技术高效破坏cccDNA，促进HBV清除，为慢乙肝抗病毒治疗提供了新的思路。该项研究得到国家十二五重大科技专项计划“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”项目和国家自然科学基金的支持。
论文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28839466
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
dsRNA（double-stranded RNA）介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径：特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA（small interfering RNA 或short interfering RNAs）siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径：要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’－5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶（RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶）作用加工裂解21－23核甘酸干扰RNA片断（siRNA）Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物（RNA－induced silencing complex or RISC）siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
请有经验的战友指点，若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章．
非常感谢！
本是小菜鸟，目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响，需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况，但是无论如何夜找不到抑制剂，做RNA干扰的话经费就超出预算了！急求各位大神，帮忙出个解决方案吧！非常感谢！
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