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RayBiotech/Human/Mouse Phospho-4E-BP1 (T36) ELISA/1 Plate Kit/PEL-4EBP1-T36-1
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Antigen Information
Accession Number:
- Q13541
Gene ID:
- 1978
Gene Symbols:
- EIF4EBP1
Protein Name & Synonyms:
Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1 (4E-BP1) (eIF4E-binding protein 1) (Phosphorylated heat- and acid-stable protein regulated by insulin 1) (PHAS-I)
Assay Format
Pathway:
- AMPK Signaling
- PI3K-AKT Signaling
- Translation
Specificity:
The antibody pair provided in this kit recognizes human and mouse 4E-BP1 phosphorylated at site Threonine-36.
Number of Targets Detected:
1
Species Detected:
- Human
- Mouse
Compatible Sample Types:
- Cell Lysates
- Tissue Lysates
Design Principle:
- Sandwich-based
Method of Detection:
Colorimetric
Quantitative/Semi-Quantitative:
- Semi-Quantitative
Solid Support:
96-well Microplate
Product Specifications
Size:
1, 2, or 5 x 96-Well Strip Microplate Kit
Introduction
RayBio® Phospho-4E-BP1 (Thr36) ELISA kit is a very rapid, convenient and sensitive assay kit that can monitor the activation or function of important biological pathways in human and mouse cell lysates. By determining 4E-BP1 protein in your experimental model system, you can verify pathway activation in your cell lysates. You can simultaneously measure numerous different cell lysates without spending excess time and effort in performing a Western Blotting analysis.This Sandwich ELISA kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the measurement of human and mouse phospho-4E-BP1. An anti-pan 4E-BP1 antibody has been coated onto a 96-well plate. Samples are pipetted into the wells and 4E-BP1 present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and rabbit anti-4E-BP1 (Thr36) antibody is used to detect phosphorylated 4E-BP1. After washing away unbound antibody, HRP-conjugated anti-rabbit IgG is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of 4E-BP1 (Thr36) bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.
Product Features
- Rapidly measure phosphorylated protein in lysates
- Screen numerous different cell lysates without performing a Western Blot analysis
- Minimal hands-on time, convenient, and non-radioactive material
Application Notes
Kit Components
- Pre-Coated 96-well Strip Microplate
- Wash Buffer
- Anti-Phospho Antibody
- HRP-Conjugated Secondary Antibody
- Assay Diluent
- TMB One-Step Substrate
- Stop Solution
- Lysis Buffer
- Positive Control Sample
Other Materials Required
- Distilled or deionized water
- 100 ml and 1 liter graduated cylinders
- Tubes to prepare sample dilutions
- Protease and Phosphatase inhibitors
- Precision pipettes to deliver 2 µl to 1 ml volumes
- Adjustable 1-25 ml pipettes for reagent preparation
- Benchtop rocker or shaker
- Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm
Protocol Outline
- Prepare all reagents and samples as instructed in the manual.
- Add 100 µl of sample or positive control to each well.
- Incubate 2.5 h at RT or O/N at 4 °C.
- Add 100 µl of prepared primary antibody to each well.
- Incubate 1 h at RT.
- Add 100 µl of prepared 1X HRP-Streptavidin to each well.
- Incubate 1 h at RT.
- Add 100 µl of TMB One-Step Substrate Reagent to each well.
- Incubate 30 min at RT.
- Add 50 µl of Stop Solution to each well.
- Read at 450 nm immediately.
Typical Data
Positive Control
HeLa cells were treated with FBS. Solubilize cells at 4 x 107 cells/ml in Cell Lysate Buffer. Serial dilutions of lysates were analyzed in this ELISA. Please see step 3 of Part VI Reagent Preparation for detail.
Insulin Stimulation of 293 Cell Line
293 cells were treated or untreated with Insulin. Cell lysates were analyzed using this phosphoELISA and Western Blot.
Storage/Stability
Upon receipt, the kit should be stored at –20°C. Please use within 6 months from the date of shipment. After initial use, Wash Buffer Concentrate (Item B), Assay Diluent (Item E), TMB One-Step Substrate Reagent (Item H), Stop Solution (Item I) and Cell Lysate Buffer (Item J) should be stored at 4°C to avoid repeated freeze-thaw cycles. Return unused wells to the pouch containing desiccant pack, reseal along entire edge, and store at –20°C. Item D, store at 2-8°C for up to one month (store at -20°C for up to 6 months, avoid repeated freeze-thaw cycles). Reconstituted Positive Control (Item K) should be stored at -70°C.
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2021-07-29
是指免疫系统中的免疫细胞和免疫分子之间,以及与其它系统如神经内分泌系统之间的相互作用,使得免疫应答以最恰当的形式维持在最适当的水平。 免疫调节可比喻为机体的交响乐队, 配合好--识别和清除抗原,对自身成分产生免疫耐受,维持内环境的稳定。 配合差--病原微生物感染、肿瘤、自身免... 查看更多
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2021-08-16
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2019-01-31
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2018-07-17
021-33779006 618066667G7B6细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠CD25) 7G7B6细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠CD25),进口细胞传代复苏服务,【细胞株细胞系@上海通善】。7G7B6细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠CD25)请电话联系业务员订购产品,正品保证,服务至上,售后舒心。细胞培养服务抗体定制服务多肽合成服务实验外包服务生物实验服务代做实验服务 核心代理品牌:rochehttp: 查看更多
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2018-07-17
021-33779006 61806666M3/38.1.2.8 HL.2细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠巨噬细胞抗体Mac-2) M3/38.1.2.8 HL.2细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠巨噬细胞抗体Mac-2),进口细胞传代复苏服务,【细胞株细胞系@上海通善】。M3/38.1.2.8 HL.2细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠巨噬细胞抗体Mac-2)请电话联系业务员订购产品,正品保证,服务至上,售后舒心。 查看更多
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碱性***酸酶(AP)标记的兔抗小鼠IgG兔抗鼠IgG / AP猫。量大小:0.1ml浓度为2mg/ml缓冲= 0.01m TBS(pH7.4)1%牛血清白蛋白,0.03% proclin300和50%甘油。背景:Immunoglobulin G(IgG),是一个最丰富的蛋白质,与正常血清8-17毫克/毫升之间血。IgG对我们防御微生物很重要,而分子是由B淋巴细胞产生的,作为我们适应性免疫反应的一部分。IgG分子有两个独立的功能:与引起反应 查看更多
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2021-07-25
上海乔羽生物科技有限公司在发布的HRP标记羊抗小鼠IgM/GoatAnti-MouseIgM*HRP供应信息,浏览与HRP标记羊抗小鼠IgM/GoatAnti-MouseIgM*HRP相关的产品或在搜索更多与HRP标记羊抗小鼠IgM/GoatAnti-MouseIgM*HRP相关的内容。 查看更多
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2021-07-16
产品编号:F030209
保存条件:-20℃避光保存。 查看更多
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2021-07-24
上海樊克生物科技有限公司在发布的Rabbit anti-mouse Kappa light chain/RBITC 罗丹明标记的兔抗小鼠k链抗体厂家供应供应信息,浏览与Rabbit anti-mouse Kappa light chain/RBITC 罗丹明标记的兔抗小鼠k链抗体厂家供应相关的产品或在搜索更多与Rabbit anti-mouse Kappa light chain/RBITC 罗丹明标记的兔抗小鼠k链抗体厂家供应相关的内容。 查看更多
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2018-07-17
021-33779006 61806666F4/80细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠巨噬细胞) F4/80细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠巨噬细胞),进口细胞传代复苏服务,【细胞株细胞系@上海通善】。F4/80细胞【@上海通善】小鼠杂交瘤细胞(抗小鼠巨噬细胞)请电话联系业务员订购产品,正品保证,服务至上,售后舒心。细胞培养服务抗体定制服务多肽合成服务实验外包服务生物实验服务代做实验服务 核心代理品牌:rochehttp: 查看更多
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2021-08-04
点击PE/Cy5.5标记大鼠抗小鼠CD45R/B220抗体查看更详细产品说明,更多应用、储存、价格、货期等信息请致电400-6800-868垂询SouthernBiotech中国区域授权总代理艾美捷科技... 查看更多
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FITC标记山羊抗小鼠123
snowmaia2021-08-19
山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体123
final07102021-08-15
我理解是同一种属的IGM和IGG的重链恒定区有相同的免疫原性因此用IgG(H+L)产生的二抗能和IgM产生结合不知道这样理解对不对
求助流式细胞术测巨噬细胞表型123
Melody_Arrow2021-07-23
流式抗体,大鼠抗小鼠FOXP3 单克隆抗体, MF14, PE M300F309A...123
筱缧呵呵2021-07-27
【求助】大公司的大鼠抗小鼠单克隆抗体检出好几条带,是不是同源性...123
futureyu2021-08-14
免疫学中羊抗鼠IGg抗体,羊抗兔IGg抗体是什么意思?悟空问答123
天堂龟虎2021-07-22
免疫荧光 双标123
4699337612021-08-12
小鼠肝脏组织内参用小鼠来源的一抗,二抗可以用山羊抗大鼠的抗体吗...123
stumsjd2021-08-05
网络采购平台123
孩子路过122018-02-02
1 一抗的物种来源2 一抗是属于哪个类或亚类二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体.单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗体。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。如果你不知道一抗是哪一类别或亚类,那么抗小鼠IgG是一个不错的选择,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。下面总结了几种具有不同特异性的二抗:针对整个抗体分子(H+L)具有特异性:如anti-IgG(H+L),此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合,即与抗体分子的 Fc,F(ab’)2/Fab部分(见图5)均可反应,anti-IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应(如IgM和IgA),因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链(?链或?链)。针对Fab片段具有特异性:这类抗体与重链轻链均可以结合,由于它们可以与轻链反应,它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。这对Fc片段或重链具有特异性:这类抗体和重链的Fc部分反应,一次它们是类别特异性的(即gamma链特异性抗体只与IgG反应,mu链特异性抗体只识别IgM,依此类推)。轻链(lambda,kappa)特异性:与所有类别的抗体反应,因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链。经过吸附处理的二抗:不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理,以减少非特异性背景。例如,如果是小鼠的组织或细胞,那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合。但是此种抗体识别表位的数量被大大减少。整个IgG分子:此种抗体适用于多数情况。F(ab’)2片段:该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成,这些抗体用在特定的情况中,如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。Fab片段:它们只有一个结合位点,一般用来封闭内源性免疫球蛋白。一般来讲,耦联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),荧光基团(FITC, RRX, TR, PE)和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA,最常用的二抗是酶标二抗,而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用biotin/avidin检测系统。5 抗体的纯度:展开
Re:【求购】请问哪里可以买到cy5标记的山羊抗小鼠二抗?123
sweetmiaomiao2021-08-11
脂质体介导的cho细胞转染——脂质体介导的基因真核细胞转染毕业...123
大爱古月哥欠啊2018-02-03
一抗就是用来和你要检测的蛋白发生免疫反应的抗体
确定了需要检测样品的种属,就可以选择对应的一抗
而二抗是根据一抗来选择的,比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的
确定了需要检测样品的种属,就可以选择对应的一抗
而二抗是根据一抗来选择的,比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的
【求助】抗小鼠的抗体可以用于抗大鼠么 形态学与生理生化讨论版 丁...123
lulusmileo2021-07-31
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