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Altogen/Neuro-2a Transfection Kit (Neuroblastoma, CCL-131)/1.5 ml/6873
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Altogen/Neuro-2a Transfection Kit (Neuroblastoma, CCL-131)/1.5 ml/6873
品牌 / 
Altogen
货号 / 
6873
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Transfection Reagent for Neuro-2a Cells (Neuroblastoma Cells, CCL-131)

  • Proprietary cationic lipids formulation
  • Effective and robust intracellular delivery
  • Kit includes Transfection Enhancer reagent
  • Produces consistent results, lot-to-lot, plate-to-plate, and well-to-well
  • Work in the presence of serum
  • A proven reagent for establishing stable cell lines
  • Download in vitro Neuro2a transfection protocol: [PDF]
  • Download Neuro2a CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
  • Download PowerPoint presentation for Neuro2a cells transfection kit: [PPT]
  • Developed and manufactured by Altogen Biosystems

Transfection Efficiency:

Reagent exhibits at least 71% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.

Transfection Protocol and MSDS:

Download Altogen Biosystems Neuro2a Transfection Protocol: [PDF]

Download MSDS: [PDF]

Neuro-2a Cell Line:

Neuroblastoma is the most frequent extracranial solid tumor in children, and roughly half of the patients experience bone metastasis accompanied by bone pain, leading to poor prognosis for those affected. The Neuro-2a cell line was established from brain tissue of an albino house mouse (Mus musculus) with neuroblastoma. These cells exhibit neuronal and amoeboid stem cell morphology, making them uniquely useful for scientific study. Also, the Neuro-2a cell line is susceptible to herpes simplex virus, human poliovirus 1, and vesicular stomatitis virus. Neuro-2a cells have been known to create large amounts of microtubular protein. Neuro-2a cells make for reliable transfection hosts due to their neuronal and amoeboid morphology. Altogen Biosystems offers in vitro transfection reagents delivering satisfactory results, including a liposome formulation Neuro-2a transfection reagent kit for neuroblastoma cells that yields high transfection efficiency and is considered an appropriate host for studying brain tumors.

Data:

Neuro2a Transfection Kit

Figure 1. Cyclophilin B silencing efficiency was determined by qRT-PCR in Neuro2a cells transfected by Cyclophilin B siRNA or non-silencing siRNA control following the recommended transfection protocol. Cyclophilin mRNA expression levels were measured 48 hours post-transfection. 18S rRNA levels were used to normalize the Cyclophilin B data. Values are normalized to untreated sample. Data are presented as means ± SD (n=6).

Neuro2a-cells-transfection-protocol

Figure 2. Protein expression of Cyclophilin B in Neuro-2a cells. DNA plasmid expressing Cyclophilin B or siRNA targeting Cyclophilin B were transfected into Neuro-2a cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.

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Neuro-2a Transfection Kit

Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems is a life sciences company that manufactures over 100 cell type specific and pre-optimized transfection kits, electroporation buffers, and targeted in vivo delivery kits and reagents. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide highly efficient intracellular delivery of biomolecules (proteins, DNA, mRNA, shRNA and siRNA, and small molecule compounds). Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.

Altogen Labs Research Services:

Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).

Volume Options:

  • 0.5 ml (Catalog #6872)
  • 1.5 ml (Catalog #6873)
  • 1.5 ml CRISPR (Catalog #2184)
  • 8.0 ml (Catalog #7073)

AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。 


Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒


120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。

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有效识别 ALK 蛋白表达 实现肺癌患者个体化治疗 肺癌是全球排名第一位的肿瘤杀手。与 30 年前相比,我国肺癌死亡率上升了 465%[1],发病率高居榜首。肺癌通常分为非小细胞肺癌(Non-small-cell carcinoma,NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。其中 NSCLC 占了肺癌的 85%。 随着肿瘤分子生物学的进展,临床上对 NSCLC 的认识正不断深入。研究表明,50% NSCLC 的发生是由于一系列的驱动 查看更多>
Isolation of Protein from TissuePlace the tissues on labeled aluminum foil and immediately place in dry ice. It is imperative that the tissues stay cold so tha 查看更多>
Lysis buffer.The choice of lysis buffer depends on what the cells were labeled with and whether you want to obtain an active kinase. The lowest background is o 查看更多>
If your peptide is synthesized with a terminal cysteine residue (i.e., a free sulfhydryl group, -SH), you can use any maleimide-activated carrier protein to cr 查看更多>
Cell Lysates For Western Blotting Reagents / Solutions Lysis Buffer:10ml 10% Sodium dodecyl sulphate (SDS)10ml Glycerol10ml b-mercaptoethanol8ml 0.5M Tris pH6 查看更多>
1、染色过强 原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长 降低抗体滴度(一般指浓缩性抗体)抗体 孵育时间:室温1小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 查看更多>
转膜:小分子量的蛋白半干转效果比较好,大分子量(100KD)以上建议湿转。具体转膜条件需要多摸一下。30-80KD半干转恒流1mA/cm2,1-1.5h 都可以,大分子湿转100V,2.5h以上应该可以,转完膜丽春 查看更多>
1、问:免疫荧光:用免疫荧光方法做同样的内容,组织切片和培养细胞,两者操作过程中有哪些不同?参考见解:只是固定方法不同,细 查看更多>
我就跑胶和转膜谈一点儿自己的体会1、跑胶 电泳Buffer重复利用的时候要注意,不能混浊,有时候能用个3-4次,有时候第二次都不行了,事先前预电泳一下,看看气泡的均匀度;Buffer一定要淹 查看更多>
分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上 取得了良好的分离效果时,可以将其放大,应用到制备色谱上,由此,我们需要考虑调整上样量,流速,梯度:1.上样量的调整:他与分析色谱柱和制备色谱柱的柱长和柱内径有关:具体关系时;制备柱上样量/分析柱上样量=制备猪场/分析柱长*制备柱内径 查看更多>
6. 染色的选择OO. Western Blot哪种染色好?解答:(1)阴离子染料是最常用的,特别是氨基黑,脱色快,背景低检测极限可达到1.5μg,考马虽然与氨基黑有相同的灵敏度,但脱色慢,背景高。丽 查看更多>
SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。... 查看更多>
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酶免疫组化实验 123
你大爷KdOa2017-10-02
这个具体不是很清楚,建议参考elisa试剂盒实验说明书 参考具体操作步骤再进行操作本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
我打算从中山公司定SANTACRUZ公司的mmp-9抗体,但是听师姐说这个公司
的抗体不容易染色,哪为同仁有这方面的经验?另外基因公司卖的cellsignalingtechnology的抗体要1875元,而中山公司卖的这个抗体只有800多,其中差距在哪里?请赐教

本人新手,最近做免疫组化,需要双染确定细胞。预实验做了两个抗体的单染,效果都不错。但是准备做双染的时候发现实验室里的双染试剂盒两个都是抗鼠的。而我之前两个一抗都是兔抗体。现在只能重新订购了。请问前辈们有相关推荐吗?

免疫组化超详细步骤 123
能忍自安2017-10-02
我要做泛素在昆虫体内在病毒感染前后表达的区别,准备使用免疫组化的方法,可是我是个新手,查资料来说也是比较乱,说的很多方法,有没有人推荐一个简单实用的方法!说的具体一点,通俗一点!谢谢!

本人对软骨石蜡切片做了MMP-13的免疫组化染色,首次做,无法判断染色部位,请各位帮忙看一下


浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,既使是即用型的抗体也应如此,不能只简单的按说明书进行染色。(2)抗体孵育时间过长或温度较高:解决办法是,严格执行操作规程,最好随身佩带报时表或报时钟,及时提醒,避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的时间不是传统的1小时,而是30分钟,因此,要根据染色结果进行调整。(3)DAB变质和显色时间太长:DAB最好现用现配,如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长,因为在没有酶的情况下,过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控,达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时,这样做似乎不现实,但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控,避免显色时间过长。(4)组织变干:修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细,采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈,可以有效的避免液体流失,也能提高操作速度。(5)切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长(大于24小时):原因上不清楚,但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复,第二天加抗体进行免疫组化染色,如果将装有切片和修复液的容器放在4?C冰箱过夜,对结果无明显影响,如果放在室温,特别是炎热的夏天,会出现背景着色,因此,不可存放时间太长。(6)一抗变质、质量差的多克隆抗体:注意抗体的有效期,过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。
单靠免疫组化的方法是不能定量,定性的。

Bone Mesenchymal Stem Cells 作为一个细胞群体,还没有发现有特定细胞表面marker. 对于那些可以代表自我更新和分化的marker, 也不清楚到底要发现哪一个的表达才能确定该细胞就是BMSC。

目前常用的方法,就是采用培养,colony-forming unit-fibroblasts (CFU-F)这个方法。一般BMSC可以24-48小时贴壁。

流式细胞计数,比如STRO-1,但是一般认为STRO-1阳性的细胞更趋向于造血干细胞,和BMSC简单区别还不是很清楚。

这里有个培养分化的产品
http://www.rndsystems.com/pdf/SC020.pdf

GlucosestarvationcausestranslocationofAMPKβ2tothelysosomeinHEK-293cellsthatisdependentonN-myristoylation.Theexperimentwasperformedinβ2KOcellsasinFig.1c,exceptthatthelysosomalMarkerLAMP1(taggedwithRFP)wasco-expressedwiththewild-typeormutantAMPKβ2.Upperpanelsshowmergedimagesstainedblue(4′,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI),nuclei),red(LAMP1,lysosomes)andgreen(AMPKβ2,detectedusingantibodyvalidatedine),incellsincubatedwithorwithoutglucosefor20 min.Lowersmallpanelsaremagnificationsoftheareasindicatedbydashedboxesintheupperpanels,showing(LtoR)redandgreenchannelsandmergedimages.

下面的这段话是图注,图注的意思我明白,但是我想知道merge后的图看什么颜色的荧光,蓝色是细胞核,红色是lysosome(位于胞质),绿色是AMPKβ2,该实验是想观察AMPKβ2是否转位到lysosome上了,如果确实发生了AMPKβ2转位到lysosome上,那么merge后是红色与绿色融合在一起,是吗?融合在一起发什么颜色的光了?

有的,我们实验室黑白两色都有,从上海晶安生物订购的。
(1)一方面,防止切片从4度直接放入PBS易脱片
(2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。
(3)其实,我更赞同后一种说法,因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后,直接用PBS洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩!
免疫组化中,所染色的蛋白的位置与该蛋白的特性有关系。在现有所研究的蛋白中,不少蛋白存在核转位的情况, 也就是说当细胞培养的环境或者刺激的因素不同,该蛋白会出现从胞浆到细胞核的表达位置的改变。有时候表达不变仅仅是从胞浆转位到细胞核,有时候还伴有表达的上调,比如nf-kb。
那要看你检测什么了,通常检测GAG用阿新蓝染色或甲苯胺蓝,检测胶原当然是免疫组化染色最好,如果没条件就用MASSON三色吧!