Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase is a recombinant, thermostabile Taq DNA polymerase complexed with a thermolabile, neutralizing antibody that blocks the 5′→3′ polymerase activity prior to the initial DNA denaturation step of PCR (1,2). Such antibody-mediated Hot-Start capability enhances the overall specificity, sensitivity and yield of the PCR by reducing nonspecific amplification and primer-dimer formation prior to PCR cycling, and allows the convenience of reaction set up at room temperature. When the temperature of the PCR reaction mix reaches ≥94°C during the initial DNA denaturing step of PCR cycling, activity of the Taq DNA polymerase is fully restored. Phoenix Hot Start Taq DNA Polymerase, like standard Taq DNA polymerase, also has 5′→3′ exonuclease activity, but lacks any detectable 3′→5′ exonuclease activity.
Source of ProteinA recombinant E. coli strain carrying the Taq DNA polymerase gene from the thermophilic organism Thermus Aquaticus YT-1 complexed with a monoclonal antibody derived from murine cell culture.
Supplied in20 mM Tris-HCl100 mM NaCl0.1 mM EDTAStabilizer50% GlycerolpH 7.5 @ 25°C
Supplied With:5X Phoenix Hot Start Taq Reaction Buffer (B7590)5X Phoenix Hot Start Taq GC Reaction Buffer (B7591)
Unit Definition1 unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid-insoluble material in 30 minutes at 75°C.
Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学,其测序产品市场占有率达80%。
酶科技公司产品包括八类:超纯连接酶如T4连接酶、超纯poly酶、ArcherTM系列测序工具(ArcherProducts)、连接蛋白、DNA修饰酶、NGS文库制备(NGSLibraryConstruction)、核酸和RNA酶。
Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学。目前市场上80%测序产品来自Enzymatics(“Todayourproductsunderpinover80%ofthesequencingreactionsthatarerunaroundtheglobe”)。Enzymatics产品的好处之一--能提高效率:NatureMethods中提到“使用Enzymatics超纯连接酶,连接步骤的效率得以提高,连接片段的产量增加了20-30%”。好处之二--有效降低测序成本:遗传学界的泰斗GeorgeChurch更是认为Enzymatics是"apowerfulcatalystinthedemocratizationofsequencing"。合作伙伴包括:BGI,BerryGenomics,Illumina,454LifeSciences和IonTorrentSyst,皆对Enzymatics的出品赞不绝口。
Enzymatics--核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix--N2050L,N2050F
核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix
摘要:四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)
产品描述
Anequimolar(25mM)mixtureofthefournaturaldeoxynucleotides.
四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)
SuppliedAs:25mMeachdNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)atpH7.5
产品信息
PartNumberN2050L,N2050F
Concentration25mM
UnitSize100µmol,20µmol
产品特性
StorageTemperature-25to-15°C
Purity≥99%
BasePurity≥99.5%
Pyrophosphate≤0.003pmol/pmolofnucleotide
EnzScript™(MMLV逆转录酶,RNaseH-)
摘要:基于RNA的DNA聚合酶,无核酸内切酶活性
产品描述:
EnzScript™(M-MLV逆转录酶RNaseHminus)属于RNA依赖的DNA聚合酶,该酶无RNaseH活性。EnzScript™被用于从polyAmRNA或总RNA中产生首链CDNA以用于下游的一些用途,如RT-PCR,cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNaseH结构域中的点突变能增加酶的热稳定性,相比于野生型M-MLV逆转录酶,它支持全长转录物种产生更高的cDNA产量
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用takara的in-fusion方法做了个重组质粒,如左图PCR验证,右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证,两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外,其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1,2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
两个基因大小分别230kb和450kb,酶切后,450kb的有目的条带,但很弱,230kb的质粒条带亮,其下方有一很微弱条带,用的酶分别是:Ncol和Spel体系是(Takara,两个酶切体系不同,用的官网推荐体系):
NcoI1μl
Spel1μl
10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题(aagtcc变成agtcc),但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆,测序结果是不准确的,建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法?
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
3.HRM法 高分辨率熔解曲线分析(HRM)是近几年兴起的SNP研究工具,它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况,来判断是否存在SNP,而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针,操作简便、快速,成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作。
4.Mass Array法 MassARRAY分子量阵列技术是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合,实现基因分型检测。基于MassARRAY平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高达40重的PCR反应和基因型检测,实验设计灵活,分型结果准确性高。根据应用需要,对数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时,MassARRAY具有最佳的性价比,特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证,或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。
5.Illumina BeadXpress法 采用Illumina公司的BeadXpress系统进行批量SNP位点检测,可以同时检测1-384个SNP位点,往往用于基因组芯片结果确认,适合高通量检测。微珠芯片具有高密度、高重复性、高灵敏度、低上样量、定制灵活等特点,极高的集成密度,从而获得极高的检测筛选速度,在高通量筛选时可显著降低成本。向左转|向右转
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
不是很相信网上的商家,遂求助各位路过的大虾们,有用过的吗?这些酶特异性怎样啊?贵不贵,跟我直接测序相比,有优势吗?
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