RescuecloningofEZ-Tn5™transposedelements
- RescuetranspositionmutantscreatedusingtheEZ-Tn5™R6KɣoriKan-2>InsertionKit
orTnpTransposome™Kit
- PropagateplasmidstaggedwiththeEZ-Tn5™R6KɣoriKan-2>InsertionKit
TheTransforMax™EC100D™pir+ElectrocompetentE.coliandTransforMax™EC100D™pir-116ElectrocompetentE.colieachconstitutivelyexpresstheπprotein(thepirgeneproduct)forreplicationofplasmidscontainingtheR6Kγoriginofreplication(R6Kγori).ThecellsarederivedfromEpicentre'sTransforMax™EC100™ElectrocompetentE.colibyP1phagetransductionwithastraincontainingthepir+orpir-116genelinkedtoadihydrofolatereductase(DHFR)Marker.
TheTransforMaxEC100Dpir+cellswillmaintainR6Kγoricontainingplasmidsatapproximately15copiespercell,1forcloningofpotentiallytoxicorunstableDNAsequences.TheTransforMaxEC100Dpir-116cellsareforhigh-copypropagationofupto250rescueplasmidcopiespercell.1
Benefits
- AcceptslargeclonesforunbiasedpropagationandstABIlityoflargerescueclones.
- lacZΔM15forblue/whitescreeningofrecombinants.
- Restrictionminus[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]enablesefficientcloningofmethylatedDNA.
- Endonucleaseminus(endA1)toensurehighyieldsofDNA.
- Recombinationminus(recA1)forgreaterstabilityoflargeclonedinserts.
Genotypes
TransforMaxEC100Dpir+ElectrocompetentE.coli:
F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80dlacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsL(StrR)nupGpir+(DHFR)TransforMaxEC100Dpir-116ElectrocompetentE.coli:
F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80dlacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsL(StrR)nupGpir-116(DHFR)
TransformationEfficiency
Greaterthan5×109colonyformingunits(cfu)/µgwithpR6KancontrolDNA.
References
- Metcalf,W.W.etal.(1994)Gene138,1.
ORDERINFORMATION
Eachproductcontains5tubeseachcontaining100µLofelectrocompetentcells,whichisenoughcellsfor10electroporations.AcontrolvectorcontainingandR6Kγoriisalsoincludedwitheachproduct.ebiomall.com
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但是在选择的时候，也需要注意其他的一些问题。
1、采用何种原料和抗体，是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作，吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
elisa试剂盒就查下博欧特生物
使用方法：
1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofecttransfectionreagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下：
实验方法
转染试剂：Turbofecttransfectionreagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（EngreenBiosystemCo,Ltd）
待处理细胞：humanCD8+T细胞
1.针对Turbofect转染的方法
每孔培养体积均为100μL，细胞数目在105左右。
取0.5μLagomir，加入9.5μL无血清RPMI1640，充分混匀；
取0.2μLTurbofecttransfectionreagent和agomir稀释液充分混合。
转染复合物制备完成；混匀后室温下孵育15-20分钟，直接取10μL加入已铺好细胞的孔中，继续培养24h收取细胞，用PBS洗涤3次以上，以备RNA抽提。
转染Mix的配制：100nMago/N.C.：（0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640）×2.5=1.25+0.5+23.25
2.EntransterTM-R4000转染
每孔培养体积均为100μL，细胞数目在105左右。
取0.5μLagomir，加入9.5μL无血清RPMI1640，充分混匀，制成10μLagomir稀释液；
取0.25μLEntransterTM-R4000，然后加入9.75μL无血清稀释液体，充分混匀，制成10μLEntransterTM-R4000稀释液；
将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合（可用振荡器或加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。
转染复合物制备完成；
将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中，前后移动培养皿，混合均匀；
转染后6h观察细胞状态，并更换培养基，继续培养24h后收取细胞，用PBS洗涤3次以上，以备RNA抽提。
转染Mix的配制：100nMago/N.C.：（0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640）×2.5=1.25+23.75；Etranster稀释液：（0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640）×5=1.25+48.75（室温静置5分钟），取20μL至ago和N.C.管中，室温静置15分钟。
实验结果
结论：从目的miRNA表达水平的检测结果来看，转染24h后，英格恩生物公司（EngreenBiosystem）的EntransterTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。
讨论：从实验结果来看，英格恩生物公司（EngreenBiosystem）的EntranstenTM-R4000(ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂(ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物（EngreenBiosystem）最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA，而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系，包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分，主要是脂多糖中的类脂A，在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率，此外会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。
对重复性要求不高的试验，一般没有问题的，只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题，推荐收到货之后，进行适当分装，用多少，拿出来多少最好。
如题，PolyplusTransfection转染试剂在中国区的代理商有哪些？求推荐1-2个靠谱的，谢谢！
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