- Specification
- Product Description:
- Mouse monoclonal antibody raised against partial recombinant mouse Abcc9.
- Immunogen:
- Recombinant protein corresponding to amino acids 1505-1546 at C-terminus of mouse Abcc9.
- Sequence:
- SSIVDAGLVLVFSEGILVECDTGPNLLQHKNGLFSTLVMTNK
- Host:
- Mouse
- Reactivity:
- Human, Mouse, Rat
- Form:
- Liquid
- Conjugation:
- A680
- Purification:
- Protein G purification
- Isotype:
- IgG2a
- Recommend Usage:
- ImmunocytochemistryImmunofluorescenceImmunohistochemistry (Formalin/PFA-fixed paraffin-embedded sections)Western Blot (1:1000)The optimal working dilution should be determined by the end user.
- Storage Buffer:
- In PBS, pH 7.4 (50% glycerol, 0.09% sodium azide).
- Storage Instruction:
- Store at -20°C.
- Note:
- This product contains sodium azide: a POISONOUS AND HAZARDOUS SUBSTANCE which should be handled by trained staff only.
- Datasheet:
- Download
- Applications
- Western Blot (Tissue lysate)
- Western Blot analysis of rat brain membrane lysate with Abcc9 monoclonal antibody, clone S319A-14 (A680) (Cat # MAB18464).
- Immunohistochemistry (Formalin/PFA-fixed paraffin-embedded sections)
- Immunocytochemistry
- Immunocytochemical staining of SK-N-BE with Abcc9 monoclonal antibody, clone S319A-14 (A680) (Cat # MAB18464). (A) DAPI (blue) nuclear stain (B) Phalloidin Texas Red F-Actin stain (C) Abcc9 Antibody and (D) Composite.
- Immunofluorescence
- Application Image
- Western Blot (Tissue lysate)
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- Immunohistochemistry (Formalin/PFA-fixed paraffin-embedded sections)
- Immunocytochemistry
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- Immunofluorescence
- Gene Information
- Entrez GeneID:
- 20928
- Protein Accession#:
- P70170
- Gene Name:
- Abcc9
- Gene Alias:
- AI414027,AI449286,SUR2A,SUR2B,Sur2
- Gene Description:
- ATP-binding cassette, sub-family C (CFTR/MRP), member 9
- Gene Ontology:
- Hyperlink
- Other Designations:
- ATP-binding cassette, sub-family C, member 9,sulfonylurea receptor 2,sulfonylurea-binding protein 2
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缺点:质粒仍然较大,转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性,局限了基因编辑的运用范围,而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
是的,确切来说是大量表达。 大肠杆菌是基因重组技术中常用的细菌,将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素),由于细菌繁殖速度快,通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素,再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。
流程大概是这样的:首先获得小鼠ES细胞系,测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体,将打靶载体转入一定数目ES细胞中,然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞,是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传,从而得到带有修饰基因的突变小鼠,而后可以对其进行表型分析。
尽量简洁
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
是不是CRISPRall-in-one只能设置一个sgRNA?
目前,来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白(含有两个核酸酶结构域,可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单(5’-NGG-3’),几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点,因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞,是目前最高效的基因组编辑系统[1]。
通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造,将其连接在一起得到sgRNA(single guide RNA)。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行操作[2,3]。
目前常用的CAS9研究方法是通过普通质粒,质粒构建流程如下:
Cas9质粒构建
目前常见的CAS9普通质粒有(汉恒生物提供cas9质粒试剂盒):
虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果,但是质粒转染具有效率低,作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题,常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒,慢病毒常用质粒见addgene(lentiCRISPR v2,lentiGuide-Puro,lentiCas9-Blast),慢病毒可以整合入宿主基因组中,长期稳定的表达(汉恒生物提供CRISPR/cas9 慢病毒包装),但是由于慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比较大(大于4kb),且长期插入可能导致乱切,脱靶等,同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因,腺病毒更有优势,腺病毒克隆能力强,获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说,作用是时间也比较长,可以达到更理想的敲除效果。
昨日,NatureMethods上发表的一篇论文指出:CRISPR-Cas9基因编辑技术导致数百种意料之外的脱靶突变,该论文在业界引发了不小的轰动,也使该技术遭到了质疑。
众所周知,CRISPR-Cas9基因编辑技术凭借其简易、高效和多样化的特点,目前被越来越多的人认为是癌症的“控制中心”,可以用来修复导致失明的基因突变、治疗生物的遗传疾病、甚至通过编辑人类胚胎基因来找出导致不孕和流产的原因。
蛋白质数据库中编号为5AXW的金黄色葡萄球菌的Cas9蛋白晶状结构
然而,昨日发表的论文联合作者、哥伦比亚大学医学中心的StephenTsang博士说,“我们一致认为,CRISPR引起的偏靶突变这一发现具有非常严重的潜在危害,其中包括单核苷酸突变和基因组非编码区域的突变。”
在这项研究中,研究人员对课题组此前获得的进行过CRISPR基因编辑的小鼠进行了全基因组测序,并进行了健康程度比对。
他们发现:CRISPR基因编辑技术确实成功修复了小鼠体内导致失明的基因,但通过全基因组测序后发现小鼠体内有超过1500个单核苷酸发生突变,并且有100个以上的位点发生发生了大片段的缺失和插入。
同时,Tsang研究团队的报告指出:上述这些突变无一通过计算机设置的算法预测到。
NatureMethod论文中的部分关键实验结果统计
StephenTsang博士进一步说道,“研究人员一般并不会使用全基因组测序手段去检测脱靶效应导致的基因突变位点,并且可能忽视了潜在的重要突变位点,因为即便是单碱基突变也有可能造成较大的影响。我们希望,这一研究结果能够鼓励其他人使用全基因组测序作为确定CRISPR技术所有脱靶效应的方法,从而达到更安全、更精准的基因编辑”。
当谈及对于CRISPR技术用于疾病治疗的前景,该研究的共同通讯作者VinitMahajan博士说:“虽然我们依然对CRISPR持乐观态度。但作为医生,我们知道,每一种新疗法都有一些潜在的副作用,我们需要知道这些副作用是什么。”
参考资料:https://www.sciencealert.com/turns-out-crispr-gene-editing-can-cause-hundreds-of-unexpected-mutations
https://eurekalert.org/pub_releases/2017-05/cumc-cge052617.php
https://phys.org/news/2017-05-crispr-gene-hundreds-unintended-mutations.html
https://phys.org/news/2017-04-accurate-dna-method.html
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