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Abnova/Abcc9 monoclonal antibody, clone S319A-14 (A680)/MAB18464
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Abnova/Abcc9 monoclonal antibody, clone S319A-14 (A680)/MAB18464
品牌 / 
Abnova
货号 / 
MAB18464
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  • Specification
  • Product Description:
  • Mouse monoclonal antibody raised against partial recombinant mouse Abcc9.
  • Immunogen:
  • Recombinant protein corresponding to amino acids 1505-1546 at C-terminus of mouse Abcc9.
  • Sequence:
  • SSIVDAGLVLVFSEGILVECDTGPNLLQHKNGLFSTLVMTNK
  • Host:
  • Mouse
  • Reactivity:
  • Human, Mouse, Rat
  • Form:
  • Liquid
  • Conjugation:
  • A680
  • Purification:
  • Protein G purification
  • Isotype:
  • IgG2a
  • Recommend Usage:
  • ImmunocytochemistryImmunofluorescenceImmunohistochemistry (Formalin/PFA-fixed paraffin-embedded sections)Western Blot (1:1000)The optimal working dilution should be determined by the end user.
  • Storage Buffer:
  • In PBS, pH 7.4 (50% glycerol, 0.09% sodium azide).
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  • Western Blot (Tissue lysate)
  • Western Blot analysis of rat brain membrane lysate with Abcc9 monoclonal antibody, clone S319A-14 (A680) (Cat # MAB18464).
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  • Immunocytochemical staining of SK-N-BE with Abcc9 monoclonal antibody, clone S319A-14 (A680) (Cat # MAB18464). (A) DAPI (blue) nuclear stain (B) Phalloidin Texas Red F-Actin stain (C) Abcc9 Antibody and (D) Composite.
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  • Gene Information
  • Entrez GeneID:
  • 20928
  • Protein Accession#:
  • P70170
  • Gene Name:
  • Abcc9
  • Gene Alias:
  • AI414027,AI449286,SUR2A,SUR2B,Sur2
  • Gene Description:
  • ATP-binding cassette, sub-family C (CFTR/MRP), member 9
  • Gene Ontology:
  • Hyperlink
  • Other Designations:
  • ATP-binding cassette, sub-family C, member 9,sulfonylurea receptor 2,sulfonylurea-binding protein 2
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博雅辑因(北京)生物科技有限公司在发布的FGF21 Knockout Cell Lysate; FGF21基因敲除细胞裂解物-CRISPR供应信息,浏览与FGF21 Knockout Cell Lysate; FGF21基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的产品或在搜索更多与FGF21 Knockout Cell Lysate; FGF21基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的内容。 查看更多>
博雅辑因(北京)生物科技有限公司在发布的ELOF1 Knockout HEK293T Cell Line; ELOF1 基因敲除细胞-CRISPR供应信息,浏览与ELOF1 Knockout HEK293T Cell Line; ELOF1 基因敲除细胞-CRISPR相关的产品或在搜索更多与ELOF1 Knockout HEK293T Cell Line; ELOF1 基因敲除细胞-CRISPR相关的内容。 查看更多>
基因敲除 基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术,针对某个序列已知但功能未知的序列,改变生物的遗传基因,令特定的基因功能丧失作用,从而使部分功能被屏障,并可进一步对生物体造成影响,进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以... 查看更多>
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 10000平米全新模式生物研究中心:正式启用新模式生物研究中心兴建于太仓沙溪,总面积达10000平米,其中5000平米为SPF级别动物实验室,配备有IVC和EVC饲养设备超过500套,可养殖SPF级别大小鼠近30000笼,动物种群规模超10万只。 1000篇引用文献12000合作实验室:成功保障赛业生物每年可构建基因敲除鼠、转基因鼠10000例以上,合作单位涵盖全球的生命科学实验室和跨国制药公司。学术引用文献已超千篇,并多次发表在... 查看更多>
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博雅辑因(北京)生物科技有限公司在发布的CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA供应信息,浏览与CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9 Validated SLC12A9 sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的内容。 查看更多>
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1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在,运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础,但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点,通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性,从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下:四环素诱导型;干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
话说CRISPR技术的利与弊123
愿萌安好5311262017-10-29
优点:使用方便,构建简单,可以覆盖大多数区域的基因编辑需求,成本低。
缺点:质粒仍然较大,转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性,局限了基因编辑的运用范围,而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
这是个理解的问题目的基因与质粒结合利用了碱基互补配对但质粒进入受体细胞不需要碱基互补配对即使整合到染色体的dna上你也只能说整合过程利用了碱基互补陪读而不是那个导入过程
哪里可以做CRISPR/Cas9基因敲入小鼠,有谁做过
是的,确切来说是大量表达。 大肠杆菌是基因重组技术中常用的细菌,将外源目的基因(如人胰岛素基因)导入大肠杆菌后可在大肠杆菌内表达目的蛋白(如胰岛素),由于细菌繁殖速度快,通过发酵便可在短时间内获得大量胰岛素,再经多步分离、纯化便得到了药用胰岛素。
流程大概是这样的:首先获得小鼠ES细胞系,测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体,将打靶载体转入一定数目ES细胞中,然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞,是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传,从而得到带有修饰基因的突变小鼠,而后可以对其进行表型分析。
基因敲除为什么会导致表达量的下降原因是什么?
尽量简洁
最新一期Nature上,张锋实验室发表了《InvivogenomeeditingusingStaphylococcusaureusCas9》,在文章中,他们用腺病毒AAV包装SaCas9和gRNA,靶向小鼠肝脏中胆固醇调节基因Pcsk9。注射AAV一周内,他们观察到>40%基因改变,血清中Pcsk9下降。那么问题来了,这种效率情况下,可否靶向精子或者卵细胞中的特定基因,然后通过交配获得杂合子,进一步获得纯合子。这样是否可行?谢谢!
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html

是不是CRISPRall-in-one只能设置一个sgRNA?

基因敲除小鼠 123
阿豪系列2552021-08-26
指利用同源重组技术,将目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或功能域用一段外源DNA序列替代,获得在整个发育时期(从1细胞胚胎期到成年期)的全身所有组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。2.优缺点:优点:打靶策略的设计及打靶载体构建简单;缺点:目的基因的敲除可能引起胚胎致死或导致其他基因的表达失调。如果预测存在这种风险,可以使用条件性基因敲除设计策略。3.原理:常规基因敲除策略是以筛选基因新霉素(Neo)取代目的基因的一个或多个外显子来实现目的基因的敲除。该基因敲除发生在全身所有的细胞及组织中,可能存在胚胎致死风险,条件性基因敲除策略能够规避这一风险。
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中,CRISPR系统共分成3类,其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可,这为其能够广泛应用提供了便利条件[1]。

目前,来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白(含有两个核酸酶结构域,可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。

由于PAM序列结构简单(5’-NGG-3’),几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点,因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞,是目前最高效的基因组编辑系统[1]。

通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造,将其连接在一起得到sgRNA(single guide RNA)。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接,得到可以同时表达两者的质粒,将其转染细胞,便能够对目的基因进行操作[2,3]。

目前常用的CAS9研究方法是通过普通质粒,质粒构建流程如下:

Cas9质粒构建

目前常见的CAS9普通质粒有(汉恒生物提供cas9质粒试剂盒):

虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果,但是质粒转染具有效率低,作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题,常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒,慢病毒常用质粒见addgene(lentiCRISPR v2,lentiGuide-Puro,lentiCas9-Blast),慢病毒可以整合入宿主基因组中,长期稳定的表达(汉恒生物提供CRISPR/cas9 慢病毒包装),但是由于慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比较大(大于4kb),且长期插入可能导致乱切,脱靶等,同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因,腺病毒更有优势,腺病毒克隆能力强,获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说,作用是时间也比较长,可以达到更理想的敲除效果。

昨日,NatureMethods上发表的一篇论文指出:CRISPR-Cas9基因编辑技术导致数百种意料之外的脱靶突变,该论文在业界引发了不小的轰动,也使该技术遭到了质疑。


众所周知,CRISPR-Cas9基因编辑技术凭借其简易、高效和多样化的特点,目前被越来越多的人认为是癌症的“控制中心”,可以用来修复导致失明的基因突变、治疗生物的遗传疾病、甚至通过编辑人类胚胎基因来找出导致不孕和流产的原因。


蛋白质数据库中编号为5AXW的金黄色葡萄球菌的Cas9蛋白晶状结构


然而,昨日发表的论文联合作者、哥伦比亚大学医学中心的StephenTsang博士说,“我们一致认为,CRISPR引起的偏靶突变这一发现具有非常严重的潜在危害,其中包括单核苷酸突变和基因组非编码区域的突变。”


在这项研究中,研究人员对课题组此前获得的进行过CRISPR基因编辑的小鼠进行了全基因组测序,并进行了健康程度比对。


他们发现:CRISPR基因编辑技术确实成功修复了小鼠体内导致失明的基因,但通过全基因组测序后发现小鼠体内有超过1500个单核苷酸发生突变,并且有100个以上的位点发生发生了大片段的缺失和插入。


同时,Tsang研究团队的报告指出:上述这些突变无一通过计算机设置的算法预测到。


NatureMethod论文中的部分关键实验结果统计


StephenTsang博士进一步说道,“研究人员一般并不会使用全基因组测序手段去检测脱靶效应导致的基因突变位点,并且可能忽视了潜在的重要突变位点,因为即便是单碱基突变也有可能造成较大的影响。我们希望,这一研究结果能够鼓励其他人使用全基因组测序作为确定CRISPR技术所有脱靶效应的方法,从而达到更安全、更精准的基因编辑”。


当谈及对于CRISPR技术用于疾病治疗的前景,该研究的共同通讯作者VinitMahajan博士说:“虽然我们依然对CRISPR持乐观态度。但作为医生,我们知道,每一种新疗法都有一些潜在的副作用,我们需要知道这些副作用是什么。”


参考资料:https://www.sciencealert.com/turns-out-crispr-gene-editing-can-cause-hundreds-of-unexpected-mutations

https://eurekalert.org/pub_releases/2017-05/cumc-cge052617.php

https://phys.org/news/2017-05-crispr-gene-hundreds-unintended-mutations.html

https://phys.org/news/2017-04-accurate-dna-method.html


利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在,运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础,但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点,通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性,从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下:四环素诱导型;干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
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什么是CRISPR/CAS9技术?什么是CRISPR/CAS9文库
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