请使用支持JavaScript的浏览器! Altogen报价单 Altogen Biosystems抗体品牌,Altogen/Whole Cell Lysate/1 mg of HT-29 Whole Cell Lysate(Catalog #8946),细胞裂解和提取物,天然蛋白,蛋白类,,Altogen蚂蚁淘商城
商品信息
联系客服
Altogen/Whole Cell Lysate/1 mg of HT-29 Whole Cell Lysate(Catalog #8946)
郑重提醒:
无质量问题不接受退换货,下单前请仔细核对信息。
下单后请及时联系客服核对商品价格,订单生效后再付款。
Altogen/Whole Cell Lysate/1 mg of HT-29 Whole Cell Lysate(Catalog #8946)
美元价:
(友情提示:该价格仅为参考,欢迎联系客服询价!)
数    量:
免费咨询热线
4000-520-616

Description

NOTE: To place order using Credit Card, P-Card, or Purchase Order – please choose kit size above and click “Add to cart” button. You can place order online without creating an account.

Whole Cell Lysate, 1 mg (2 mg/ml)

General Notes:
Growth media: DMEM supplemented with 10% FBS

Cell lysate was prepared by homogenization in RIPA buffer (25mM Tris HCl pH 7.6, 150mM NaCl, 1% NP-40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS) supplemented with 5 µg/ml of aprotinin and 5 µg/ml of leupeptin. Cell debris were removed by centrifugation (5 minutes at 12,000 RPM). Concentration of total protein was determined using BCA protein assay.

Storage Instructions
Shipped at 4°C. Upon delivery aliquot. Store at -80°C. Avoid freeze / thaw cycle.

Volume
0.5 ml

Concentration
1 mg at 2 mg/ml

Purity
Whole Cell Lysate

Altogen Labs Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).

Volume Options:

  • 1 mg of A204 Whole Cell Lysate (Catalog #8890)
  • 1 mg of A375 Whole Cell Lysate (Catalog #8891)
  • 1 mg of A431 Whole Cell Lysate (Catalog #8892)
  • 1 mg of A549 Whole Cell Lysate (Catalog #8893)
  • 1 mg of AGS Whole Cell Lysate (Catalog #8894)
  • 1 mg of AR42J Whole Cell Lysate (Catalog #8895)
  • 1 mg of ARPE-19 Whole Cell Lysate (Catalog #8896)
  • 1 mg of ASMC Whole Cell Lysate (Catalog #8897)
  • 1 mg of AsPC-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8898)
  • 1 mg of Astrocyte Whole Cell Lysate (Catalog #8899)
  • 1 mg of B16-F10 Whole Cell Lysate (Catalog #8900)
  • 1 mg of BALB/3T3 Whole Cell Lysate (Catalog #8901)
  • 1 mg of bEnd-3 Whole Cell Lysate (Catalog #8902)
  • 1 mg of Beta-TC-6 Whole Cell Lysate (Catalog #8903)
  • 1 mg of BHK-21 Whole Cell Lysate (Catalog #8904)
  • 1 mg of BJ Whole Cell Lysate (Catalog #8905)
  • 1 mg of BMS2 Whole Cell Lysate (Catalog #8906)
  • 1 mg of BT-20 Whole Cell Lysate (Catalog #8907)
  • 1 mg of BxPC-3 Whole Cell Lysate (Catalog #8908)
  • 1 mg of C2C12 Whole Cell Lysate (Catalog #8909)
  • 1 mg of C6 Whole Cell Lysate (Catalog #8910)
  • 1 mg of Caco-2 Whole Cell Lysate (Catalog #8911)
  • 1 mg of Caki-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8912)
  • 1 mg of Calu-3 Whole Cell Lysate (Catalog #8913)
  • 1 mg of Calu-6 Whole Cell Lysate (Catalog #8914)
  • 1 mg of Capan-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8915)
  • 1 mg of CFPEo Whole Cell Lysate (Catalog #8916)
  • 1 mg of CHO Whole Cell Lysate (Catalog #8917)
  • 1 mg of CHO-K1 Whole Cell Lysate (Catalog #8918)
  • 1 mg of Chromaffin Whole Cell Lysate (Catalog #8919)
  • 1 mg of CLBPEC Whole Cell Lysate (Catalog #8920)
  • 1 mg of COLO205 Whole Cell Lysate (Catalog #8921)
  • 1 mg of COS-7 Whole Cell Lysate (Catalog #8922)
  • 1 mg of CT26.WT Whole Cell Lysate (Catalog #8923)
  • 1 mg of D-407 Whole Cell Lysate (Catalog #8924)
  • 1 mg of D-451 Whole Cell Lysate (Catalog #8925)
  • 1 mg of Detroit551 Whole Cell Lysate (Catalog #8926)
  • 1 mg of DI-TNC1 Whole Cell Lysate (Catalog #8927)
  • 1 mg of DLD-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8928)
  • 1 mg of DU145 Whole Cell Lysate (Catalog #8929)
  • 1 mg of FaDu Whole Cell Lysate (Catalog #8930)
  • 1 mg of Fibroblast Whole Cell Lysate (Catalog #8931)
  • 1 mg of H9c2 Whole Cell Lysate (Catalog #8932)
  • 1 mg of HCAEC Whole Cell Lysate (Catalog #8933)
  • 1 mg of HCC1937 Whole Cell Lysate (Catalog #8934)
  • 1 mg of HCN-1A Whole Cell Lysate (Catalog #8935)
  • 1 mg of HCS-2 Whole Cell Lysate (Catalog #8936)
  • 1 mg of HCT-116 Whole Cell Lysate (Catalog #8937)
  • 1 mg of HEK-293 Whole Cell Lysate (Catalog #8938)
  • 1 mg of HeLa Whole Cell Lysate (Catalog #8939)
  • 1 mg of HeLa-S3 Whole Cell Lysate (Catalog #8940)
  • 1 mg of Hep-3B Whole Cell Lysate (Catalog #8941)
  • 1 mg of Hepa 1-6 Whole Cell Lysate (Catalog #8942)
  • 1 mg of HepG2 Whole Cell Lysate (Catalog #8943)
  • 1 mg of HMEC Whole Cell Lysate (Catalog #8944)
  • 1 mg of HT-1080 Whole Cell Lysate (Catalog #8945)
  • 1 mg of HT-29 Whole Cell Lysate (Catalog #8946)
  • 1 mg of HUH-7 Whole Cell Lysate (Catalog #8947)
  • 1 mg of HUVEC Whole Cell Lysate (Catalog #8948)
  • 1 mg of IMR-90 Whole Cell Lysate (Catalog #8949)
  • 1 mg of IRR-MRC5 Whole Cell Lysate (Catalog #8950)
  • 1 mg of KB Whole Cell Lysate (Catalog #8952)
  • 1 mg of Keratinocyte Whole Cell Lysate (Catalog #8953)
  • 1 mg of L6 Whole Cell Lysate (Catalog #8954)
  • 1 mg of LNCAP Whole Cell Lysate (Catalog #8955)
  • 1 mg of LoVo Whole Cell Lysate (Catalog #8956)
  • 1 mg of LS-174T Whole Cell Lysate (Catalog #8957)
  • 1 mg of MCF-7 Whole Cell Lysate (Catalog #8958)
  • 1 mg of MDA-MB Whole Cell Lysate (Catalog #8959)
  • 1 mg of MDCK Whole Cell Lysate (Catalog #8960)
  • 1 mg of MEF Whole Cell Lysate (Catalog #8961)
  • 1 mg of MG-63 Whole Cell Lysate (Catalog #8962)
  • 1 mg of MIA PaCa Whole Cell Lysate (Catalog #8963)
  • 1 mg of MRC5 Whole Cell Lysate (Catalog #8964)
  • 1 mg of NCI-H1299 Whole Cell Lysate (Catalog #8965)
  • 1 mg of NCI-H1975 Whole Cell Lysate (Catalog #8966)
  • 1 mg of NCI-H23 Whole Cell Lysate (Catalog #8967)
  • 1 mg of NCI-H292 Whole Cell Lysate (Catalog #8968)
  • 1 mg of NCI-H358 Whole Cell Lysate (Catalog #8969)
  • 1 mg of NCI-H441 Whole Cell Lysate (Catalog #8970)
  • 1 mg of NCI-H460 Whole Cell Lysate (Catalog #8971)
  • 1 mg of NCI-N87 Whole Cell Lysate (Catalog #8972)
  • 1 mg of Neuro-2a Whole Cell Lysate (Catalog #8973)
  • 1 mg of NIH3T3 Whole Cell Lysate (Catalog #8974)
  • 1 mg of NTERA-2 Whole Cell Lysate (Catalog #8975)
  • 1 mg of PANC-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8976)
  • 1 mg of PC-12 Whole Cell Lysate (Catalog #8977)
  • 1 mg of PC-3 Whole Cell Lysate (Catalog #8978)
  • 1 mg of PGHAM Whole Cell Lysate (Catalog #8979)
  • 1 mg of RD Whole Cell Lysate (Catalog #8980)
  • 1 mg of SK-BR3 Whole Cell Lysate (Catalog #8981)
  • 1 mg of SK-MEL-28 Whole Cell Lysate (Catalog #8982)
  • 1 mg of SKNAS Whole Cell Lysate (Catalog #8983)
  • 1 mg of SK-N-MC Whole Cell Lysate (Catalog #8984)
  • 1 mg of SK-N-SH Whole Cell Lysate (Catalog #8985)
  • 1 mg of SK-OV-3 Whole Cell Lysate (Catalog #8986)
  • 1 mg of SW480 Whole Cell Lysate (Catalog #8987)
  • 1 mg of T98G Whole Cell Lysate (Catalog #8988)
  • 1 mg of U87 Whole Cell Lysate (Catalog #8989)
  • 1 mg of VERO Whole Cell Lysate (Catalog #8990)
  • 1 mg of Weri-Rb-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8991)
  • 1 mg of ZR-75-1 Whole Cell Lysate (Catalog #8992)
  • 1 mg of 293 Whole Cell Lysate (Catalog #8993)
  • 1 mg of 293T/17 Whole Cell Lysate (Catalog #8994)
  • 1 mg of 3LL Whole Cell Lysate (Catalog #8995)
  • 1 mg of 3T3 L1 Whole Cell Lysate (Catalog #8996)
  • 1 mg of 4T1 Whole Cell Lysate (Catalog #8997)
  • 1 mg of 786-O Whole Cell Lysate (Catalog #8998)

AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。 


Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒


120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。

蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
公司介绍
公司简介
蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
蚂蚁淘承诺
正品保证: 全球直采 在线追溯 蚂蚁淘所有产品都是自运营的,我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权; 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程, 确保货物的来源; 正规报关,提供13%增值税发票。
及时交付: 限时必达 畅选无忧 蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员,他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节; 同时通过在线的流程监控,蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上, 部分产品甚至能做到7-10天到货,即蚂蚁淘的“时必达”服务。
轻松采购: 在线下单 简单省事 蚂蚁淘的价格是真实透明的,并且具有很大的价格优势,不需要繁杂的询价比价; 报价单与合同可以直接在线生成或打印;就像在京东购物一样, 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购,订单详情会告诉您所有进程。
售后申请: 耐心讲解 优质服务 蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时, 您可通过我的订单提交您的“申请售后”, 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理, 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线:4000-520-616。
西安昌岳生物科技有限公司在发布的绿原酸50%绿咖啡豆提取物 抗氧化 保健品原料供应信息,浏览与绿原酸50%绿咖啡豆提取物 抗氧化 保健品原料相关的产品或在搜索更多与绿原酸50%绿咖啡豆提取物 抗氧化 保健品原料相关的内容。 查看更多>
浙江圣氏生物科技有限公司在发布的辅助治疗猴头菇提取物供应信息,浏览与辅助治疗猴头菇提取物相关的产品或在搜索更多与辅助治疗猴头菇提取物相关的内容。 查看更多>
10ml 三去污裂解液配方如下:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0): 0.07882g 150 mmol/L NaCl: 0.08775g0.2 g/L叠氮钠: 0.002g 1 g/LSDS 0.01g100 mg/L Aprotin 0.001g10 g/L NP-40 0.1g 5 g/L去氧 查看更多>
RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同... 查看更多>
. Overview This protocol provides considerations and generalized procedures for the use of dialysis to alter the composition of a protein solution. It is a use 查看更多>
大黄提取物是由西安四叶草生物科技有限公司代理或销售的SYC品牌的试剂,产品来源于西安。西安四叶草生物科技有限公司是中国最权威的大黄提取物试剂销售服务商之一,在西安等地方销售大黄提取物试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业大黄提取物仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的大黄提取物产品 查看更多>
北京四正柏生物科技有限公司在发布的红细胞裂解液 (10x)供应信息,浏览与红细胞裂解液 (10x)相关的产品或在搜索更多与红细胞裂解液 (10x)相关的内容。 查看更多>
济南嘉格生物科技有限公司在发布的天然扇贝提取物供应信息,浏览与天然扇贝提取物相关的产品或在搜索更多与天然扇贝提取物相关的内容。 查看更多>
南京森贝伽生物科技有限公司在发布的通用细胞裂解液供应信息,浏览与通用细胞裂解液相关的产品或在搜索更多与通用细胞裂解液相关的内容。 查看更多>
HPLC 优点:高压 速度快 分析精度高 所需样本量少,主要用于分析 纯化多肽类缺点:柱子较贵 有些需要用乙氰甲醇等有毒有害试剂 不能或只能纯化 很小量的蛋白AKTA 系统 优点: 中低压 容易放大 可大规模纯化蛋白类 常规只用无机盐类试剂 可配备各种介质纯化不同蛋白 可自己灌胶 费用较少缺点:分析精 查看更多>
2017-12-26
人肺动脉内皮细胞裂解液是由上海中乔新舟生物科技有限公司代理或销售的sciencell品牌的试剂,产品来源于美国。上海中乔新舟生物科技有限公司是中国最权威的人肺动脉内皮细胞裂解液试剂销售服务商之一,在上海等地方销售人肺动脉内皮细胞裂解液试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业人肺动脉内皮细胞裂解液仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的人肺动脉内皮细胞裂解液产品 查看更多>
常见问题
蚂蚁淘所售产品均为正品吗?
蚂蚁淘的创始人兼CEO是钟定松先生,具有十年的从业经验,在业界享有良好的口碑; Ebiomall是跨境直采平台,我们直接从厂家采购,自己的团队负责国际物流和清关,中间没有第三方,蚂蚁淘承诺所售产品仅为正品,假一罚十。
下单后可以修改订单吗?
未确认状态的订单可以修改,打开“订单详情”页面,点击右上角的“修改订单”即可,若已审核确定,则订单无法修改。
商品几天可以发货?
现货产品付款审核后即可发货,大部分期货产品在3周左右即可到货,提供时必达服务的产品订单审核十天内即可发货。
订单如何取消?
如订单处于未确定状态,进入“我的订单"页面,找到要取消的订单,点击“取消订单”按钮。
可以开发票吗?
本网站所售商品都是正规清关,均开具13%正规发票,发票金额含配送费金额,另有说明的除外。
如何联系商家?
蚂蚁淘任何页面都有在线咨询功能,点击“联系客服”、“咨询”或“在线咨询”按钮,均可咨询蚂蚁淘在线客服人员, 或拨打4000-520-616,除此之外客户可在 联系我们页面找到更多的联系方式。
收到的商品少了/发错了怎么办?
同个订单购买多个商品可能会分为一个以上包裹发出,可能不会同时送达,建议查看订单详情是否是部分发货状态;如未收到,可联系在线客服或者致电4000-520-616。
退换货/维修需要多长时间?
一般情况下,退货处理周期为客户收到产品一个月内(以快递公司显示签收时间为准),包装规格、数量、品种不符,外观毁损、短缺或缺陷,请在收到货24小时内申请退换货;特殊商品以合同条款为准。
商品咨询
DNA提取加细胞裂解液的量是固定的吗?有的书上说加50μl,有的加500μl,不知为什么,请指教!谢谢!
细胞癌变后,细胞膜表面的糖蛋白会减少。甲胎蛋白是一种,糖蛋白。这种长蛋白主要来自于胎儿的干细胞,常人体内极少,而且甲胎蛋白一般是用来检测肝癌的。 当肝细胞发生癌变时,恢复了产生这种蛋白质的功能,而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加,甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标,所以要如果说细胞癌变后,产生甲胎蛋白并不是非常的严谨。因为它只是作为肝癌的一个指标罢了。而抗原的表示范围比较大。所以这里是使用的抗原而不是甲胎蛋白。
裂解细胞用的溶液;适合目的蛋白的溶液,例如PBS,tris盐溶液
蛋白提取时使用蛋白裂解液将细胞裂解,然后离心分为上清液和下层沉淀,如果你说的是这个上清液的话,那么这个上清液是细胞中的可溶性蛋白,一般包括细胞质的蛋白和细胞核的可溶性蛋白,下层沉淀主要是细胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色质之类的。
可以用温和的红细胞裂解液,和外周血一样,裂解液不会对单个核细胞有影响,HY StemCell是一家为干细胞研究服务的知名公司,有各种生化试剂供客户选择,可以查询各大品牌红细胞裂解液,供参考
我想问一下我提出大鼠脑线粒体后提线粒体蛋白的方法:用常规细胞裂解液【7mmol/L尿素(urea)、2mmol/L硫脲(thiourea)、4%CHAPS、10mmol/L硫苏糖醇(DTT)、pharmalyte(载体两性电介质就是IPG的buffer)pH3-10(1:50稀释)】60-100ul,吹打并振荡使蛋白尽量溶解。12000g离心10min。收集上清即为蛋白质提取物。

这样可不可以?

另还有几个问题:1、这样的裂解液裂解线粒体提蛋白可不可以
2、裂解液加多少剂量
3、12000g离心10min和30分钟有没有区别
细胞裂解液的配制123
__蔷衣°24902017-10-03
【1】可以把裂解液用量调整为50-100微升。

【2】加入裂解液后可以加用超声破碎细胞。

【3】提完细胞的器具可以在显微镜下看一下,剩余的细胞还多不多。如果还多,说明细胞提取的不彻底,还要改进方法,争取提取的细胞彻底一些。
(仅供参考)
蛋白在细胞内,需要把细胞裂解才能提出
ripa裂解液对核蛋白的提取好点。加到细胞培养皿里面,摇15分钟,然后刮下来吸出来,是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟。
  裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
各位大侠:俺在提取细胞总蛋白时,蛋白质提取出像果冻一样的东西,俺的步骤如下:
1细胞用冷PBS洗两遍,离心,去除上清;
2加50~100ul三去污细胞裂解液;
3加PMSF,AP各1ul;
4用100ulTIp头吹打数次;
5置冰上15分钟
612000rpm,15min,4度
7取上清。这时,上清呈黏液状,用枪头吸时会将细胞碎片一起吸出。拉丝度很长,测蛋白浓度显示有,各位,这是怎么回事?做WB会影响结果吗?这种蛋白质在保存过程中会容易降解吗?
有的资料上显示第四步,不是用Tip头吹打,而是将EP管在桌上猛敲击几下,这个方法我也试过,但是结果蛋白浓度很低,没有出现上述现象,这是怎么回事呀?
各位大虾,我想请教下,本人试验作香烟烟雾提取物(CSE)对细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响,采用ECV304,拟将细胞破碎后用碧云天的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,用GENMED细胞/组织悬液细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒测定COX活性,但是我不知该选用和种方法裂解细胞,请各位多多指导,小妹万分感谢,
不知单纯使用冰浴中超声裂解够了吗?还是说要选用裂解液呢?最主要的就是我不知道该怎么赔这个裂解液,使其COX活性不产生影响
一、细胞裂解的准备
(1)1×107细胞重悬,其来源可为新鲜样品或贮存于-80℃1mol冰冻清洗缓冲液
的无DMSO的样品,冰冻缓冲液包括10mMHEPES(pH7.5),1.5mMMgCl2,10mMKCl,
1mM二硫苏糖醇(DTT),然后离心(16000rpm、4℃、1min)。
(2)重悬细胞团于100ul冰冻裂解缓冲液,其包含10mMTris-HCl(pH7.5),1mMMgCl2,1mMEGTA,0.1mM苯甲基磺酰氟(DMSF),5mMB2巯基乙醇,0.5%CHAPs(Pierce)和10%甘油。
(3)冰育30分,然后在超速离心机中离心30分钟。
(4)去上清,液氮速冻沉淀,裂解细胞于-80℃保存。
二、扩增
(1)在微量管中冻干0.1ug荧光标记的cx反转引物,蜡封(5′CCCTTACCCTTACCC
TTACCCTTA3′)。
(2)于蜡界之上加50ulTRAP反应物,包括Tris-Cl(pH8.3)20mM,1.5mMMgCl2,
63mMKCl,0.005%,TWeen20,1mMEGTA,50mM三磷酸脱氧核苷,0.1ug荧光标记
TS前导引物(5′AATCCGTCGAGCAGAGTT3′),1ugT4基因32蛋白,牛血清白蛋白0.1mg/ml,2UTaqNDA聚合酶(Takara,shyzou)和5ugCHAPs细胞提取液。荧光标记TS引物可由市场购得。扩增前5ug提取物与1ugRNA酶37℃水浴20分钟,为了端粒酶活性的标准化,运用体内端粒酶活性标准(TTAS):TS重叠引物和CX重叠引物(TS:5′AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTC3′及CX:5′CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTATAGGCGCTCAATGTA3′)TS(18bp)和CX(24bp)序列为普通型,下划线标出的为成肌素序列(每个15bp)。成肌素CDNA通过这些引物扩
增产生了150bp的产物,它可用与ITAS扩增端粒酶梯度相同的TS引物和CX引物进行
再扩增。每一项测定用25attogram以显现I-TAS,它并不干扰TRAP测量。
(3)置于22℃10分钟,作为TS引物由端粒酶介导的延伸。90℃热灭活反应物90秒。
(4)PCR扩增,条件94℃30S,50℃30S,72℃1.5min;共27循环。
三、分析
(1)制备8%的变性胶(longRanger,ATBiochem)含6M尿素。
(2)加电泳缓冲液(1×TBE)于电泳槽。
(3)上样缓冲液与产物各1ul混合后上样,上样缓冲液含90%甲酰胺和10%蓝葡聚
糖(Bluedertian)。
(4)95℃预发性4分钟,速冷,上样,运用100bp,150bp,200bp大小荧光标记物。
(5)测序
(6)测序结果由FiagmuntManager程序自动分析,每一荧光峰根据大小、高度、面积定
量。因为过量扩增的产物会产生不可信的面积值,一部分PCR产物应在蒸馏水稀释后再分析