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Signalchem/Anti-phospho-IRS1 (Ser312)/100 ug/I40-365R-100
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Signalchem/Anti-phospho-IRS1 (Ser312)/100 ug/I40-365R-100
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Signalchem
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IRS1isthesubstratefortheinsulintyrosinekinasereceptoranditisexpressedinavarietyofinsulin-responsivetissues.IRS1isadockingproteinwithnointrinsicenzymaticactivity.ViaitsSH2domains,IRS1facilitatesinteractionsbetweenkeyplayersininsulinsignalingsuchastheinsulinreceptor.14-3-3competitivelybindswithIRS1againsttheinsulinreceptor(1).Thiscompetitionhasimplicationstowardstheregulationofinsulinsensitivity.IRS1hasbeenlinkedtocolorectalcanceranddietviatheregulationofplasmainsulinlevels.Thus,variationofIRS1functionmayhaveimplicationsincolorectalcancer(2).IRS1hasseveralSer/ThrphosphorylationsitesincludingSer312,whichissensitivetoTNF-alphaorcalyculinAtreatment(3)andSer636/639,whichisassociatedwithS6KandmTORactivation(4).

References:

1.Ogihara,T.etal:14-3-3proteinbindstoinsulinreceptorsubstrate-1,oneofthebindingsitesofwhichisinthephosphotyrosinebindingdomain.J.Biol.Chem.272:25267-25274,1997.2.Slattery,ML.etal:GeneticvariationinIGF1,IGFBP3,IRS1,IRS2andriskofbreastcancerinwomenlivinginsouthwesternUnitedStates.BreastCancerResTreat.2007.3.Gao,Z.etal:Serinephosphorylationofinsulinreceptorsubstrate1byinhibitorkappaBkinasecomplex.JBiolChem.2002Dec13;277(50):48115-21.4.Khamzina,L.etal:Increasedactivationofthemammaliantargetofrapamycinpathwayinliverandskeletalmuscleofobeserats:possIBLeinvolvementinobesity-linkedinsulinresistance.Endocrinology.2005Mar;146(3):1473-81.

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2021-07-19
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2021-09-18
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辣根过氧化物酶用于ELISA的标记用酶RP是一种分子量达44000的糖蛋白,由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,中性糖和氨基糖约占18%。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基,该辅基在403nm波长处有最大吸收峰,而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比,也就是所谓的RZ(ReinheitsZahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量,并非表示HRP制剂的真正纯度,而且RZ值高的HRP制剂,并不意味着酶活性也高。但可以一纯酶溶液在10mm光径403nm波长下的吸光度来计算酶浓度[1%(W/V)酶溶液吸光度为22.5,浓度为227umol/L]。纯HRP干燥贮存于一200C可保持稳定,使用1.36mol/L甘油、10mmol/L磷酸钠、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L细胞色素C(pH7.4)溶液作为基质冷冻保存,可使酶结合物稳定数年。HRP对热及有机溶剂的作用比较稳定,用甲苯与石蜡切片处理或用纯乙醇或lo%甲醛水溶液固定做冷冻切片,均不能使其活性改变。氰化物或硫化物在10-5~10-6mol/L浓度时具有可逆性地抑制HRP的作用;氟化物、叠氮化合物或羟胺仅在高于10-3mol/L浓度时抑制HRP;HRP还可被羟甲基过氧化氢不可逆地抑制。强酸也是HRP的强烈的抑制剂。因此,在酶免疫测定常选用上述的某些化合物如氟化钠、叠氮钠和强酸等作为酶反应的终止剂。此外,在配制酶免疫测定的稀释缓冲液时,为防止酶失活,应避免使用叠氮钠作防腐剂。HRP的同工酶主要可分为三种类型:①含糖量高的酸性同工酶。②等电点接近于中性(或微碱)的含糖量相对较低的同工酶。③含糖量低的碱性(PI>11)同工酶。酶免疫试验中所使用的HRP,以PI为8.7~9.0的所谓“C”同工酶为主要组成成分,其他同工酶的活性则很低。“C”同工酶的共价结构由2个密切接近的区域组成,血红素基团则位于其间而成夹心结构,糖链以8个不同的部位结合于多肽。天然的酶所带的纯电荷极少;无游离的。—氨基,仅有2个可测出的组氨酸,6个赖氨酸似乎全被糖链外壳所遮盖。因此,HRP一般仅有1~2个可用于耦联的氨基。根据HRP的催化特性,ELISA中一般使用过氧化氢(H2O2)作为HRP底物之一,在供氢体(即色原底物)存在时,HRP与H2O2的反应迅速而又专一。由图4—1可见,HRP被H2O2二价地氧化形成复合物I,而复合物I又可与氢供体的二步连续的单价相互作用而还原至起始状态。复合物Ⅱ是被氧化的带一个电子的中间产物,当H2O2:过量,由于复合物Ⅲ或Ⅳ的形成,酶活性受抑制。30%的H2O2并不稳定。由于H2O2既为HRP的底物,也为其抑制剂,因而ELISA要想得到满意的测定结果,H2O2必须限定在一定的浓度范围内,终浓度通常为2~6mmol/L。然而在实际研究工作中,一般很少注意这一点。大多数研究者所使用的H2O2的浓度常较理想反应所需的量大2~4倍。吸附于固相的HRP较游离的HRP更易受过量H2O2的抑制。如果30%H:O:贮存液浓度经测定证实确为30%,则稀释10000—12000倍常是较为理想的底物。H2O2的摩尔消光系数为10mm光径240nm波长下为43.6,因此,可通过这种方式来检测H2O2工作溶液的浓度。固相ELISA中,当温度高于20~C时,HRP活性常较低,在底物溶液中加入非离子去垢剂聚山梨醇—20或TritonX-100可延迟HRP的失活,且可使反应温度加大,但非离子去垢剂的这种酶活性保护效应依氢供体的不同而有差异。如以2,2’—联氮—双—[3—乙基苯并噻唑啉]—6—磺酸(ABTS)为氢供体,则只能保护20%的酶活性,而以邻联茴香胺(ODA)为氢供体时,酶活性的保护提高至90%。HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶,主要是因为其一方面易于提取,价格相对低廉;另一方面性质稳定,耐热及有机溶剂的作用,与抗原或抗体耦联后,活陛很少受损失。
辣根过氧化物酶(HRP)系列产:品广泛用于工业、农业、医药、生物及环保等多个方面。可用该酶配的血糖、甘油三酯、胆固醇等生化诊断试剂盒及酶免法(EHSA)测定中的酶标抗体能性。
磷酸缓冲溶液已经配好了,是不是在里面加辣根过氧化物酶就行了,加多少?最好说明出处,或者简单说一下怎么算的
患者信息:女29岁北京西城区病情描述(发病时间、主要症状等):抗甲状腺过氧化物酶抗体TMAB356.1想得到怎样的帮助:抗甲状腺过氧化物酶抗体多少正常?请问我这种情况是得了甲亢吗?请问会不会影响我怀孕?我还有一点类似湿疣病变的细胞?我该怎...
mRNA是用地高辛标记的,用不同的方法可以检测地高辛 即可以用碱性磷酸酶标记的地高辛标抗体和 地高辛记的反应 也可以用辣根过氧化物酶标记的地高辛抗体和 地高辛记的反应
Chemetall公司介绍_图文_123
glliang7202018-01-21
我们公司有国际通行的检测方法 生产的辣根过氧化物酶都是这么检测的 上面应该有你要的内容 jiahaochem.com
抗甲状腺过氧化物酶抗体是诊断甲状腺自身免疫性疾病的首选指标,由于你没有提供你检查该项目的参考值,如果没有高于参考值,那么是正常的;如果高于参考值,那么就是升高,单一抗甲状腺过氧化物酶抗体升高是不能判断是什么疾病,需要进一步检查抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)、TRAB、甲状腺彩超、甲状腺功能等。
1.若都为正常,那么并未有太大问题,只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高,那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢,需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高,甲状腺功能下降,那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减,需要进行甲减治疗。
4.如果TGAb、TMAb高,甲状腺功能正常,那么就是桥本氏甲状腺炎,无需特殊治疗,只要定期复查甲状腺功能就可能以了,不过这种情况有可能以后演变成甲减或者甲亢。
DAB辣根氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)种借助辣根氧化物酶(HRP)用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色试剂盒DAB即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride辣根氧化物酶用底物辣根氧化物酶催化DAB产棕色沉淀该棕色沉淀溶于水乙醇DAB显色使用溶于乙醇染料进行续染色本试剂盒用于细胞或组织免疫组化或原位杂交结合辣根氧化物酶显色用于Western等结合辣根氧化物酶膜显色检测同用于细胞或组织内源性辣根氧化物酶显色
详细点的,不要拷贝现有的分光光度法测定和循环连续流动分析法。谢谢大家了啊!
过氧化物酶,酶学分类号为EC 1.11.1.7。 Donor+ H2O2--→Oxidized donor+2 H2O。
辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)比活性高,稳定,分子量小,纯酶容易制备,所以最常用。HRP广泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多个同功酶组成,分子量为40,000,等电点为PH3~9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异,但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm,一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右(最高可达3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。 1) RZ>3 活性 >250u/mg, 主要应用于免疫学,是高纯度的过氧化酶。采用特殊色谱纯化技术以除去会影响免疫学反应的同工酶B .
2) RZ>2 活性 >180u/mg ,主要应用于临床化学,我们的客户也有将这个规格的产品应用于免疫学研究的。此时,一个标准化的分析方法就变得尤为重要。
3) RZ>1 活性 >100u/mg,主要应用于血糖试纸和尿液分析试纸。
4) RZ>0.6 活性 >60u/mg ,主要应用于尿液分析试纸。向左转|向右转
抗甲状腺过氧化物酶抗体是诊断甲状腺自身免疫性疾病的首选指标,单一抗甲状腺过氧化物酶抗体升高是不能判断是什么疾病,需要进一步检查抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺微粒体抗体(TMAb)、TRAB、甲状腺彩超、甲状腺功能等。
1.若都为正常,那么并未有太大问题,只要定期复查就可以了。
2.如果TGAb、TMAb、甲状腺功能均高,那么就是桥本氏甲状腺炎并甲亢,需要抗甲亢治疗。
3.如果TGAb、TMAb高,甲状腺功能下降,那么就是桥本氏甲状腺炎并甲减,需要进行甲减治疗。
4.如果TGAb、TMAb高,甲状腺功能正常,那么就是桥本氏甲状腺炎,无需特殊治疗,只要定期复查甲状腺功能就可能以了,不过这种情况有可能以后演变成甲减或者甲亢。
EMSA结合反应:(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应:Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应:Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合...
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
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