【求助】奇怪...WB大分子蛋白能显影,内参等分子量稍小的却不行~请教原因
2021-07-21
问题描述:
本人最近在做WB时遇到一个奇怪的问题
我要做的两个目的蛋白,分子量一个是140的,另一个是36,内参用的GAPDH。这几天刚刚要做小鼠组织的蛋白,就把新提取的组织蛋白和之前做过的细胞蛋白一起上了,细胞和组织的各上了3个孔。
电泳转膜孵育等条件都是以前做成熟的
之后显影,细胞蛋白的,两个目的和内参都出得挺好;但是小鼠的组织蛋白只有分子量140的那个显出条带了,36的那个显出来的像一片水渍一样,斑片状的黑,内参有时也这样、有时干脆什么都不显。不知道这是什么原因...按说细胞同样的蛋白做出来,WB的各个步骤应该不会有太大问题的。
有点怀疑蛋白提取的不好,我提组织蛋白的的操作是在冰上进行的,裂解液也加有PMSF,用BCA法测得的蛋白浓度大概也有3~5mg/ml。
在这里求助各位高手~望给我指点一下~不胜感激啊!
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13579yyy1
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你的裂解液里面用的是什么去垢剂啊?
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13579yyy1
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另外根据我不多的经验,不推荐用GAPDH做内参,这个蛋白经常出现一些奇怪的问题。还是使用actin或者tubulin
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tangzq
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13579yyy1另外根据我不多的经验,不推荐用GAPDH做内参,这个蛋白经常出现一些奇怪的问题。还是使用actin或者tubulin非常感谢您的提示~回头我再试试~
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嗨a静香
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你的膜是多少孔径的?推荐0.22um
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