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考马斯亮蓝
R-250
及
G-250
染料
考马斯亮兰
G-250
；
名称：考马斯亮兰
G-250
别名：考马斯亮兰
G250
，酸性蓝
90
，考马斯亮蓝
G
，康美赛蓝
G-250
，亮蓝
G
英文：
COOMASSIEBRILLIANTBLUEG-250
CAS
：
6104-58-1
相对分子量：
854.04
分子结构：
性状：暗蓝
-
紫
-
棕色结晶粉末。
水中溶解度：
40g/L
（
20
℃）
，溶于甲醇、乙醇；
介绍及用途：
考马斯亮兰
G-250
用于凝胶电泳和蛋白质染色。
不用渗透到胶里就比萘酚蓝黑
B1
（
Naphthol
Blue
BlackB1
）灵敏度高
3
倍，简单而又灵敏；可以进行各种蛋白检测，和劳里反应相牵连的化学物质和游离氨
基酸对此蛋白染色检测无任何影响。也是
P2X7
嘌呤能受体激动剂。
考马斯亮兰法（
Bradford
法）测定蛋白浓度
（一）实验原理
双缩脲法（
Biuret
法）和
Folin
―酚试剂法（
Lowry
法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找
更好的蛋白质溶液测定的方法。
1976
年由
Bradford
建立的考马斯亮兰法（
Bradford
法）
，是根据蛋白质与
染料相结合的原理设计的。
这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，
因而正在得到广泛的应用。
这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰
G-250
染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料
的最大吸收峰的位置（
lmax
）
，由
465nm
变为
595nm
，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主
要是与蛋白质中碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
在
595nm
下测定的吸光度值
A595
，与蛋白质浓度成正比。
Bradford
法的突出优点是：
（
1
）灵敏度高，据估计比
Lowry
法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达
1mg
。这是因为蛋白质与染料结
合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比
Lowry
法要大的多。
（
2
）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要
5
分钟左右。由于染料与蛋白质
结合的过程，大约只要
2
分钟即可完成，其颜色可以在
1
小时内保持稳定，且在
5
分钟至
20
分钟之间，颜色
的稳定性最好。因而完全不用像
Lowry
法那样费时和严格地控制时间。
（
3
）干扰物质少。如干扰
Lowry
法的
K+
、
Na+
、
Mg2+
离子、
Tris
缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、
EDTA
等均不干扰此测定法。
