【求助】共聚焦荧光染料选择问题
2021-08-15
问题描述:
我发过的帖子,版主为什么给我删了?
我想用共聚焦观察间期染色体,用涂染探针,有一个问题很困扰我,我想涂染完染色后用DAPI复染细胞核,但是目前哈尔滨的共聚焦都没有紫外激发光,不能激发DAPI,我怎么才能实现,用红色涂一条染色体,用绿色涂另一条,用DAPI蓝色染核,同时成像呢,所说的双光子显微镜可以么?我实在很迷惑,求求版主别再删我的帖子,尽管我现在只是一个索取者,还不能给大家提供有用的信息,但是相信有一天会为大家做贡献的,谢谢了
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skinner
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hho学的很快呀.把原来的那个贴子删了吧.你的问题我不是很熟.胡乱说几句吧.首先你必须要有能激发你所需要的三种颜色的显微镜.然后在同一视野下把3种颜色各拍一张照片(数码的),保存好,利用photoshop的叠加功能可以把3张照片合为一张就可以啦.请高手拍砖.
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wangx2180
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目前我所接触的激光共聚焦都没有紫外激发光,所以不能激发DAPI。应用激光扫描共聚焦显微镜操作系统的Ar/GHeNe双通道激光系统,同时扫描FITC标记的阳性反应物和Cy3标记的阳性反应物。扫描选用的参数为:激发光波长为488nm和554nm,观测光分别为518nm和575nm,物镜为40倍,扫描方式为点扫描,Zoom为(1.0)。经Lasersharp2000软件(4.5.3)摄像,分析。共聚焦会自动扫描出三章图片(两张单染,一张合成)。效果很好。
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mixley
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hoho我很聪明的,还要叠加呀?我不能用一个...么,我看到ZEISS上有的是这样的,488/513/560,比如呀,我记不得,是什么意思呢,是不是如果我找到3种染料激发光分别是488,513,560的话,就可以同时看到3种颜色,另外,双光子是怎么回事?为什么说他可以解决紫外激发的问题?救命呀,我什么都不会,也没有镜子,怎么办?哭!
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mixley
用户
那就是说我做不了细胞核了,我要做的事染色体在细胞核中的定位,如果然不了细胞核,我怎么分析呢?为什么很多国外的文章都能做呢,就是用ZEISS510,郁闷亚?
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