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Caltag/α-L-Fucosidase (FUCA1) Assay Kit (Colorimetric)/100 assays/K219-200
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Caltag/α-L-Fucosidase (FUCA1) Assay Kit (Colorimetric)/100 assays/K219-200
品牌 / 
Caltag
货号 / 
K219-200
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BioVision

α-L-Fucosidase (FUCA1) Assay Kit (Colorimetric)

Product Code:
K219-200
Pack Size:
100 assays
Form:
Assay Kit
Applications:
Quantification
Shipping Temp:
-20°C
Storage Temp:
gel pack
Target Species:
Mammal
Product Type:
Assay Kit
Description:
α-L-Fucosidase (EC 3.2.1.51) (FUCA1) is a hydrolase that is able to cleave α-L-fucosyl moieties from glycoconjugates and oligosaccharides. Fucosidase plays pivotal roles in cell differentiation, apoptosis, inflammation and host-pathogen interaction. Furthermore, abnormal concentrations of this glycosidase have been observed in patients suffering from cancer, fucosidosis, rheumatoid arthritis, cystic fibrosis, and leukocyte adhesion deficiency. Industrial applications of α-L-Fucosidase (FUCA1) include synthesis of fucosylated analogs that could serve as antiadhesion compounds, cancer vaccines, and anti-inflammatory therapeutics. BioVision?s α-L-Fucosidase Assay Kit provides a simple, sensitive and high-throughput adaptable approach to detect physiological concentrations of this glycosidase in a variety of biological samples. In this assay, α-L-Fucosidase uses a synthetic chloro p-nitrophenol derivative (R-pNP) as an α-L-Fucosidase substrate and releases a chlorinated pNP derivative which can be measured kinetically under acidic conditions (OD 405 nm). The assay involves a one-step simple reaction, with minimal sample preparation and does not need a stop solution to complete the reaction. The assay can detect as low as 20 μU of α-L-Fucosidase activity in a variety of samples.
Supplier:
BioVision
Product Category:
Obesity and Metabolic Diseases > Other Metabolism Assays
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Product Code:
K219-200
Price (100 assays):
£350.00 excluding VAT
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这里的钳是固定的意思
电压钳技术是保持细胞膜两侧电压恒定的技术,使细胞膜两次电压稳定在某一个数值,这样就能够测定在这个电位的水平下细胞膜上离子通道的活动情况。
膜片钳技术是固定一片非常小的细胞膜,测定这片膜上的离子通道开放情况,解决了可以单个离子通道活动的测量问题。
现在的膜片钳技术同时包括了以前的电压签技术。
电生理常规技术 电生理常规技术 一.电刺激。 二.生物放大器:正确选择,植物性神经冲动幅度多为50-100μV。不同组织,应采用不同的参 数。如 ECG:振幅0.1-2mV, 灵敏度0.5-1mV,时间常数0.1-1.0s,高频滤波1KHz 植物性神经冲动:振幅50-150μV, 灵敏度25-100μV,时间常数0.01-0.1s,高频滤波3-5KHz 中枢神经元单位放电:振幅100-300μV, 灵敏度50-100μV,时间常数0.01-0.1s,高频滤波5-10KHz 三.玻璃微电极: 常用尖端0.5-5μm,向细胞内插入时,需小于0.5μm(细胞直径的1/10~1/100),且尖端的倾斜度应相当缓和,一般微电极可分为金属微电极和玻璃微电极两类。 金属微电极,现多用镀铂钨丝电极(platinum-plated tungsten electrode),在钨丝上镀铂,可极大改善电极的电学特性,噪声可大大降低,加之机械强度大,适合长期体外记录(paré D, Gaudreau H. Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats. J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 现要也常用镀银碳纤维电极。玻璃微电极记录易受机械位移的影响,加之尖端的电解质会漏出或堵塞,不适合半小时以上的长时间记录,玻璃微电极可分单管和多管微电极。 毛坯管在国外多用Pyrex管,国内多用GG-17和95料玻管。细胞外记录多采用外径1.5-2mm玻璃,细胞内记录则采用外径1mm细玻管,内外径之比约为2:3或5:6,长6-8cm。拉制前必须经过清洁处理。 清洁液:用等量的(250ml)王水(可反复应用)。一般毛坯管捆成把放入清洁液中1-2h,取出自来水冲洗20-30min,再放入无水酒精中洗 涤,再放入盛满蒸馏水烧杯中加热煮沸10min,倒去蒸馏水,再换新蒸馏水反复3次,再放入烤箱中烤干,备用,切不可用市售的洗涤剂,以防降低电极充灌液的表面张力而影响冲灌。 充灌液常用3mol/L KCl,为避免Cl-扩散,也可用2mol/L醋酸钾或柠檬酸钾充灌,也有人用0.5-1mol/L NaCl(低浓度)充灌可降低噪音。细胞外记录时,最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁胺天蓝溶液定位。在膜片钳中还常加钙螯合剂,如EGTA。 阻抗与不同组织相关。 四.电生理实验中噪声和干扰的形成和排除。 (一)来源。 1.干扰信号与生物电生理信号的鉴别。准确区分生物电信号与干扰的伪迹是电生理实验的先决条件。 2.来源。主要有三个方面: 其一。物理性干扰。1)静电和电磁的干扰:实验室附近高压电,室内日光灯可产生50Hz的静电干扰,尤其是交流电,尤其是50Hz频率干扰最大(电子设备为50Hz)。其特点是幅度大,波形规则。2)噪声干扰:电子元件本身产生杂乱无章电压和电流称噪声,一般与放大器内部元件的质量与性能有关。 其二。接地不良。1)地线电阻应小。2)仪器故障。产生漏电电流,在地线上形成电位差,产生干扰。3)地线行走过程中打圈,形成线圈,易接受电场和磁场的干扰。4)各仪器设备应采用一点接地的方式,若采用多点接地,形成大地回路,也会引起干扰。5)地线过长与电源线形成交流环路。6)误用市电三孔中性线作为大地线(中性线上有4-5A电流)。 其三。生理性干扰。1)大脑电活动时,眨眼、眼球运动均对脑电具有干扰作用。2)实验中环境温度过低,动物寒战、抖动,引起肌电的发放而干扰记录,或因呼吸运动引起记录部位机械位移引起干扰信号。3)心电干扰,频率与心电一致。 (二)排除。 1.物理性干扰。1)屏蔽法:用于低频电和静电干扰,屏蔽线分布电容较大,线与线之间不可平行排列,更不可为了美观而将多线扎在一起,这会加大分布电容,易偶合高频干扰噪声。2)远离法。3)改变位置法。依电流方向相反,产生反向磁场的原理,改变各个仪器的位置或放大器输入的方位,会使干扰磁场抵消,微电极放大器探头阻抗高,易引入干扰,实验前可反复调整其方向和位置。4)微电极记录时尽量减少微电极本身的阻抗,减少输入阻抗及干扰信号在这个阻抗上形成干扰电压降,微电极到探头的连线<5cm。5)用监听器监听噪声,以便及时排除。 2.仪器质量,尽量改进。 3.接地不良。地线应尽量短粗,不能与电源线平行或打圈,不 要接在电源线的中性线 上,地线单独埋设,埋置处应较潮湿,附近无大型变压电动机,并在坑内加些食盐。 4.检查各仪器 是否漏电。 5.慢生物电变化时用乏极化电极,实验对象宜安静,勿受振动。 (三)刺激伪迹过大及防止。1)尽量减少刺激脉冲的波宽和强度。2)在动物体或标本上,尽量延长刺激部位 的距离,在刺激电极 和引导电极之间加一接地电极,此电极离引导电极愈近,刺激伪迹就越小;采用变换刺激极性,结合叠加处理,可抵消伪迹。 注:微电极中高浓度充灌液易蒸发,造成电极回路的开路,因此常在微电极插入Ag-AgCl丝或铂金丝后,在微电极尾部开口处涂上一层凡士林,防止水分蒸发。 动物麻醉和制动下,体温会下降,故应保温调节,加温维持肛温36-38℃. 记录脊髓背角或腹角神经元将脊柱前后拉直以减小呼吸运动造成的位移。记录脑神经元应在表面用温热石蜡制成一油槽,防止血管博动和呼吸运动的影响。 五.细胞内微电极记录 多用幼年离体标本,其原因:1)幼年动物骨骼骨化不完全,结缔组织少,神经组织易于分离,标本耐缺氧能力强,有的标本可存活数小时至数天,但标本也可能发育不完全,如背根和脑干到脊髓的投射纤维要到三周动物才完全。神经纤维髓鞘化不全,其药理作用与成年动物也不同。从实验角度上讲,脊髓背腹根短,不利于电生理刺激记录。小鼠一般应小于15g,制备标本才 有可能成功,而这样小鼠背腹根神经节不利于电生理实验。最适合的动物是金黄地鼠(hamster),介于大小鼠之间,制备标本活性很好,可能与其冬眠习性有关,而且其脊髓背腹根长达20-25mm,利于电生理记录。动物选择仍依实验而定,同一标本,不同中枢结构对缺氧耐受力也不同。金黄地鼠,若观察脊髓背角神经元活动,可用150-160g体重的鼠均可,但要研究腹角神经元,则体重不宜超过30g。 离体标本的灌流注,如ACSF。其中缓冲液成分有两种,一是重碳酸盐(bicarbonate):温度低(4℃),配方有利于降低组织兴奋性。二是磷酸盐缓冲液和HEPES缓冲液:其优点是接近于 人体环境。各种缓冲液一般都先配母液,临用前一天,或临用前稀释。
一般情况下 如果想了解细胞的特性用电流钳 了解细胞receptor 用 电压钳
膜片钳技术概述123
秋雨飒2882021-08-08
膜片钳技术 是用微玻管电极(膜片电极或膜片吸管)接触细胞膜,以千兆欧姆以上的阻抗使之封接,使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域(膜片)与其周围在电学上分隔,在此基础上固定点位,对此膜片上的离子通道的离子电流(pA级)进行监测记录的方法
用场效应管运算放大器构成的I-V转换器是测量回路的核心部分。在场效应管运算放大器的正负输入端子为等电位,向正输入端子施加指令电位时,由于短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的目的,当膜片微电极尖端与默片之间形成10GΩ以上封接时,其间的分流电流达到最小,横跨膜片的电流可100%作为来自膜片电极的记录电流(lp)而被测量出来。
这一伟大的贡献,使Neher和Sakmann获得1991年度的诺贝尔生理学与医学奖。
膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。是研究离子通道的最重要的技术。目前膜片钳技术已从常规膜片钳技术(Conventional patch clamp technique)发展到全自动膜片钳技术(Automated patch clamp technique)。
1.生物体具有共同的物质基础和结构基础。细胞是一切动植物结构的基本单位。病毒没有细胞结构。细胞是生物体的结构和功能的基本单位。
2.新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础,是生物最基本的特征,是生物与非生物的最
本质的区别。
3.生物遗传和变异的特征,使各物种既能基本上保持稳定,又能不断地进化。生物的遗传特
性,使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性,使生物物种能够产生新的性状,以致形
成新的物种,向前进化发展。
4.生物体具应激性,因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境,也能影响环境。
5.组成生物体的化学元素,在无机自然界都可以找到,没有一种化学元素是生物界所特有的,这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。
6.糖类是细胞的主要能源物质,葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。
7.组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动,只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来,才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。
8.细胞膜具一定的流动性这一结构特点,具选择透过性这一功能特性。
9.细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。细胞核是遗传物质储存和复制的场所,是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。
10.构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的,而是互相紧密联系、协调一致的,一个细胞是一个有机的统一整体,细胞只有保持完整性,才能够正常地完成各项生命活动。展开
对脑片中的单个细胞做whole cell,需要不断灌流(用蠕动泵,流速2-4ml/min),电极和接地电极(浴液电极)都是用的镀AgCL的银丝,出现这样的现象:接地电极浸入浴液的一段的AgCL很快就消耗光了(肉眼看变白了),引起基线漂移,无法继续记录电流,而接在holder上的那根银丝可以用很久不被消耗。如果将其他不变,但是停止灌流,不会出现这种情况,但是脑片没办法不灌流啊。对了,我压脑片不是用的铂金做的框,是用的包了绝缘膜的钢片,不知道和这个有没有关系,但是已经做了绝缘处理了啊
这个问题出现很久了,一直没得到解决,问了好多实验室都说从来没有遇到这样的情况;问过一个工程师,他说这个不会是灌流引起的,可能是什么地方形成了短路;我以前做单细胞的时候(不用蠕动泵)也没有遇到这样的问题,在网上查了半天看见说可能是形成了原电池,导致AgCL的不断消耗,觉得很疑惑,这个原电池的另一极是什么?怎么形成的原电池?改怎么解决呢?
如果万一不行还想过把两根银丝都换成铂金丝,请问有没有谁是用铂金丝的?是不是和银丝一样用啊?有什么需要注意的?
现在因为这个没有办法做试验,心急如焚啊,请各位战友来帮帮我啊

我在做的是海马神经元的wholecellpatch,入液前给正压并hold,入液后阻值4-5M欧,碰到细胞后阻值有零点几欧的变化。撤掉正压,用嘴吸给负压(无法hold住)进行封接,但是封接时候一直没有阻值变化,更别提升到G欧级别了。我们后来也试过用注射器给负压并hold住,但是封接阻值仍旧没有非常大的变化,甚至到不了50M欧。这是为什么???求问

玛丽亚·斯克沃多夫斯卡-居里(波兰语:Maria Skodowska-Curie,1867年11月7日-1934年7月4日),常被称为玛丽·居里(法语:Marie Curie)或居里夫人(法语:Madame Curie),波兰裔法国籍女物理学家、放射化学家。
1903年和丈夫皮埃尔·居里及亨利
膜片钳的发展与应用123
JY_Maxwell2021-08-10

小弟是神经科学研究生新生一枚,导师叫我分分钟把钠钾钙离子通道的全细胞记录方法给他,现在查了一些文献有了一些内外液配方,但是不知道电压钳刺激的protocol怎么编。悬赏35蚁豆(基本全部家当)求protocol,只有钙通道的也OK哟~

膜片钳常见问题解答讲解123
红豆面包002021-08-07

膜片钳记录不到反应,只有刺激尾迹,是咋回事啊,求助,电流已经调到很大了,可是一点反应也没有

一般来说,低压电容补偿柜由柜壳、母线、断路器、隔离开关,热继电器、接触器、避雷器、电容器、电抗器、一、二次导线、端子排、功率因数自动补偿控制装置、盘面仪表等组成。硬件类一般都上硬之城看那里比较专业,专业的问题专业解决,这是最快的也是最好的方法,好过自己瞎搞,因为电子元器件的电子型号那些太多了一不小心就会弄错,所以还是找专业的帮你解决。
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