●Anti-pADPr,clone10H,mousemonoclonalantibodyThismousemonoclonalantibody,clone10H,recognizespoly(ADP-ribose).ItwasdevelopedandoriginallydescribedbyH.Kawamitsu etal. (1984) Biochemistry23,3771.Poly(ADP-ribose)isapolymersynthesizedbyaclassofenzymesnamedpoly(ADP-ribose)polymerase(PARP).UsingNAD+assubstrate,PARPcatalyzestheformationofthepolymerpADPr,withchainlengthsrangingfrom2to300residues,containingapproximately2%branchinginthechain.pADPrbecomesattachedtonuclearproteins,andtoPARPitself(automodification).Usesfortheclone10Hmonoclonalantibodyhasbeendescribedextensivelyintheliterature,andincludeWesternblotting,immunostaining(seebelow),ELISA-basedPARPactivityscreen,andimmunodotblot.
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TulipBiolabs生产用于Poly(ADP-核糖)和合成大麻素研究的蛋白质,抗体和试剂盒,可用于学术,制药,工业和政府实验室。Tulip还提供定制的ELISA分析开发生化分析,以及大分子的生物分析方法验证。专注于开发和执行针对生物分子和药物的专门化验。TulipBiolabs,Inc.成立于2000年,是一家私人研究和产品开发实验室。多年来,Tulip扩大了产品线,并完成了许多项目的合同工作。Tulip对开发用于药物发现的聚ADP-核糖基化研究试剂和测定法感兴趣。Tulip还对开发用于大分子药物组织分析和滥用药物的检测方法感兴趣。Tulip的实验室设施位于美国宾夕法尼亚州的兰斯代尔。
抗pADPr,克隆10H,小鼠单克隆抗体该小鼠单克隆抗体,克隆10H,识别聚(ADP-核糖)。它由H.Kawamitsu等人开发并最初描述。(1984)Biochemistry23,3771。聚(ADP-核糖)是由称为聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的一类酶合成的聚合物。使用NAD+作为底物,PARP可催化聚合物pADPr的形成,链长范围为2至300个残基,在链中包含约2%的支链。pADPr附着于核蛋白和PARP自身(自动修饰)。克隆10H单克隆抗体的用途已在文献中进行了广泛描述,包括Western印迹,免疫染色,基于ELISA的PARP活性筛选和免疫斑点印迹。
抗PARP1,全蛋白IgY鸡多克隆抗体TulipBiolabs,Inc.抗PARP1,目录号1051的IgY鸡多克隆抗体,是使用在杆状病毒表达系统中表达的高度纯化的重组全长人PARP1制备的。由WB,Cat。#1051识别完整的PARP1MW=113kDa,89kDa细胞凋亡诱导的裂解产物以及其他较低分子量的PARP1片段。
PARP14m3MARylated磁性亲和树脂TulipBiolabs,Inc.PARP14m3磁性树脂设计用于从细胞和组织裂解物中分离单ADP-核糖基化(MARylated)蛋白质。通过使用高度特异性的PARP14m3亲和树脂,可以从细胞或组织裂解物中分离出单ADP-核糖基化(MARylated)蛋白。使用与PARP14m3共价结合的磁珠的便利性进行纯化。可以从亲和树脂中干净地洗脱与树脂结合的蛋白质,然后通过质谱,免疫印迹和其他方法进行分析。PARP14m3磁性亲和树脂,产品目录。#2414是高度纯化的人PARP14巨域3融合蛋白构建体,在大肠杆菌中表达,并化学结合到1μm超顺磁珠上。
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物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目(标)基目前通①比较同物种间或同物种同体间;或同体同发育期或同环境条件基差异表达(基表达平行析)实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括:基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
2 基文库技术离目基
基文库指某物类型全部基集合种集合重组体形式现某物DNA片段群体与载体重组重组转化宿主细胞转化细胞选择培养基单菌落(或噬菌斑或细胞)即DNA片段克隆全部DNA片段克隆集合体即该物基文库其类型基组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库按载体智力文库、噬菌体文库、黏粒载体文库、工染色体文库等基文库构建文库筛选基主要几种:核算杂交、免疫检测、DNA同胞选择、PCR筛选等基文库构建目前基工程核工作离目进用
3 功能蛋白组离目基
蛋白组指细胞内全部蛋白存及式即基组表达产总蛋白质统称功能蛋白质组指些能涉及特定功能机理蛋白质群体主要研究蛋白质双向电泳通高效液相色谱、质普蛋白质序列进行析借用物手段则进行目基离:应用PCR进行离目基:通蛋白质序列析通密码简并性设计简并引物利用RT-PCR 目基全;应用核算杂交筛选离目基:即利用简并寡核苷酸探针筛选cDNA或基组文库;免疫雪筛选离目基:通蛋白特异抗体与目蛋白专结合表达文库离目基蛋白基
4 PCR技术基克隆应用
PCR技术已经渗透物各领域克隆获cDNA全面起着重要作用利用 PCR技术特定条件基表达进行检测即通mRNA差别显示(DDRT-PCR)鉴定离所需目基;通RT-PCR克隆目基 cDNA区域进行cDNA文库构建通锚定PCR或反向PCR快速克隆cDNA末端未知序列、功能基调控区等现用于基离克隆 PCR主要:RT-PCRDDRT-PCR用于cDNA末端快速克隆RACE(第3节)用于DNA序列克隆Panhankle- PCR、Cassette-PCR及减cDNA文库PCR构建等Panhankle-PCR、Cassette-PCR基组已知DNA相临未知序列克隆奠定良基础
5 mRNA差别显示技术离差别表达基
mRNA差异显示技术组织特异性表达基进行离种快速行效mRNA反转录与PCR技术结合发展起种RNA指纹图谱技术利用5’锚定引物oligo(dT)12MN3’端随机引物总mRNA进行PCR扩增期差异表达条带并其差异显示条带进行收、克隆
6 插入突变离克隆目基
获突变体进行未知基克隆用举T-DNA标签转座诱变离克隆目基例T-DNA标签T-DNA任何兴趣基处产插入性突变获析该基功能照突变体T-DNA左右边界间携带外源报告基片段作选择性遗传标记插入序列已知获转基重组突变体通各种克隆PCR策略加研究倘若35S强启T-DNA整合宿主基组整合内原基游则产异增加或表达空特异性改变破坏基表达效获性突变功能丧失性突变等转座标签株携带功能性转座系统植物与遗传差异同种植物杂交转座插入某特定基序列破坏该基编码蛋白进导致见表性破坏或改变产代筛选新型突变体
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV,进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒,过夜酶切,也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初,我没有BJ5183Ecoli菌株,就想当然像拿DH5a替代,但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行,挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒,就是同时含有两种质粒,即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的,二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株,采用电转化法,这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是,另外2个总是失败,原因不详。于是我就重复重复,期间,糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破,Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡,于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是,这毫无帮助,电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子,心疼的是我的细菌、质粒,用Tip又吸不出来,所以只好把它们丢掉。
Finally,我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析,原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积(>15ul)的质粒到BJ5183Ecoli菌(20ul)中时,里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流,结果杯子就破了。由此看来,气泡本身对电击可能不无影响,反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了,离子强度太高,足以导致一次实验报废。
后感:失败并不可怕,可怕的是想当然去重复,而不去探究失败的原因。朋友们,如在这方面好的经历坏的经历,尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
举例言目前家药典条宿主DNA残留检测
内容发布在蚂蚁淘和螺旋网上,有兴趣的战友也可以去那里看一下。
内容分三部分:
一、概述
1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征
2、染色体异常常见的类型
3、染色体异常的检测方法
二、荧光原位杂交及其探针
1、荧光原位杂交的原理
2、荧光原位杂交的探针
三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交(按试验流程介绍)
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FISH.pdf(1237.91k)
百度搜索NCBI gene想查找基名称输入搜索接现表格选择要查找基(主要选择物种)接页面找基各种亚型应mRNA序列编号点进串信息找CDS点页面mRNA序列显示CDS序列
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目(标)基目前通①比较同物种间或同物种同体间;或同体同发育期或同环境条件基差异表达(基表达平行析)实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括:基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
DNA杂交技术
DNA-RNA杂交技术
抗体抗原杂交技术
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