纯化蛋白后去咪唑透析液如何配制?
2017-08-22
问题描述:
各位大神,本人小白一枚,最近做镍柱纯化His标签蛋白,做到透析一步,不知道透析液该怎么配,在此请教大家!
我纯化蛋白时用的缓冲液是50mMNaH2PO4,300mMNaCl,pH8.0,洗脱缓冲液在这基础上加咪唑;
现在纯化后想透析掉咪唑,透析液是直接用结合缓冲液,还是PBS缓冲液,或是Tris-Hcl缓冲液?我考虑用结合缓冲液和PBS缓冲液是因为离子成分相近(都有NaH2PO4和NaCl),盐离子环境的变化不大,但是结合缓冲液的盐离子浓度是不是高了?PBS缓冲液pH一般是7.4,pH从8.0到7.4的变化会影响蛋白质稳定性吗?我看也有好些人用Tris-Hcl缓冲液,我也不知道该怎么选择了,各位大神能否给些建议?谢谢啦!
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合肥周三
用户
用什么缓冲液,取决于你的蛋白用途。一般用1xPBS即可。
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奉天靖难
用户
这个透析的方法应该不太好用,咪唑分子量68.0773,蛋白质分子量128-150左右,透析需要选择合适分子量的透析袋,否则多次换液亦不能去除咪唑。建议利用咪唑与蛋白之间的分子量相差近一倍的关系,可以使用分子筛,可以完全去除咪唑残留。
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