Target | 10-245 kDa Protein Marker |
Tested Applications | SDS-PAGE, WB |
Storage | Store at 4 °C for up to 3 months. For long-term storage, store at -20 °C. Avoid repeated freeze/thaw cycles. |
Buffer | 20 mM Tris-phosphate, pH 7.5, 2% SDS, 0.2 mM DTT, 3.6 M Urea, and 15% Glycerol. |
Directions for use | 3 µl/well for clear visualisation during electrophoresis on a 15-well mini-gel5 µl/well for clear visualisation during electrophoresis on a 10-well mini-gel2-3 µl/well for general Western transferring Increase the volume for thicker (> 1.5 mm) or larger gels. Do not heat, dilute or add reducing agents before loading. |
Availability | Shipped within 5-10 working days. |
Note | This product is for research use only. |
Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势,Abbexa提供包括一抗、二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。
目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂,此外,为满足研发人员特殊的实验需要,Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能,如您对产品不满意,Abbexa将直接提供退/换货服务
CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA) RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。 1. RNAi抑制转座子活性 两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 ①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关; ②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。 2. RNAi抵御病毒感染 在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。 3. RNAi参与异染色质的形成和维持 Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 4. RNAi参与机体的发育调控及生理代谢 RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。 IsotypeControl 同型对照 同型对照(IsotypeControl),使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 同型对照 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。 如果一抗是多抗,可以用annormalserum(与一抗相同的正常血清)(mustbethesamespeciesasprimaryantibody)。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b,cloneOX-42purifiedIgG,那么它的isotype是mouseIgG2a,所以可以用purified(纯化的)mouseIgG2a来做OX-42的同型对照(IsotypeControl)。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。
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雾鸿
[摘要] 本文概括介绍了与创伤愈合有关的几种生长因子,包括血小板源性生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、血管内皮生长因子、白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子;以及参与创伤愈合的4种细胞外基质:胶原蛋白、粘连糖蛋白、蛋白多糖和角质细胞胶原酶-1。初步阐明了这些创面愈合指标对鼻内镜手术术后的评估意义。
[关键词]生长因子(GrowthFactor)细胞外基质(ExtracellularMatrix)内窥镜检查(Endoscopy)
【生长因子】创伤愈合是一个复杂而又高度协调的过程,基本上可以分为局部炎症反应、细胞增殖分化和组织修复重建三个有区别又相互交错的阶段,这一过程涉及多种生长因子和细胞因子的相互作用、相互影响,共同调控细胞迁移、增生、分化、血管生成、基质沉积和组织塑形等。
1.血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)。PDGF因最初从血小板中分离出而得名,组织损伤后,平滑肌细胞、毛细血管内皮细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞和成肌细胞增生、激活都可释放PDGF,刺激多种细胞的分裂增殖,并能引起成纤维细胞、平滑肌细胞和单核细胞的增生和游走,促进纤维蛋白的生成。有人[1]认为,PDGF通过磷脂酸激酶3产生过氧化氢,从而激发炎性物质的产生。张忠明[2]对PDGF调控细胞增殖的作用机制进行了总结,PDGF与受体结合后,可通过四条途径促使细胞分裂、增殖:①酪氨酸激酶途径;②启动细胞核内C-myc、C-fos和C-jun基因的转录;③引起受体自动磷酸化和在酪氨酸残基上的胞浆底物的磷酸化;④增加胞内Ca2+和Na+/H+的交换。Piazuelo等[3]将含PDGF基因的真核表达载体转染小鼠成纤维细胞,发现转染阳性细胞中有PDGF蛋白表达,并可促进小鼠成纤维细胞增殖和胶原合成,这进一步证实PDGF参与了创伤愈合过程。
2.成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor,FGF)。1974年,Grospodarowicz首先从牛垂体中分离出一种能引起Balb/c373成纤维细胞增殖的多肽物质,并命名为成纤维细胞生长因子。FGF按其等电点的不同分为酸性FGF(a-FGF)和碱性FGF(b-FGF)。FGF是肽类生长因子,能吸引、趋化炎性细胞浸润,刺激与创伤有关的细胞快速增殖、迁移,合成新的细胞间质,毛细血管增生,新的肉芽组织形成,加速胶原沉积。同时能诱导创伤周围组织中的成纤维细胞向创面迁移,吸引并刺激一些能分泌基质降解酶的细胞到创面,刺激成纤维细胞增殖,促进创面愈合。有报道[4],角膜损伤后伤口处b-FGF表达增强。Kawaguchi等[5]研究证明,局部应用FGF-2可加速骨折的愈合。
3.表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)。EGF是从颔下腺分离出的一种6KD多肽。EGF为细胞有丝分裂原,在组织损伤修复的早期,可促进细胞增殖、迁移,强力趋化各种炎性细胞及各种炎症修复细胞向损伤部位聚集,同时对肉芽组织中的纤维和基质沉积起主导作用。Kimura等[6]证明了EGF对鼻粘膜腺体细胞的增殖作用。
4.转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF)。最初从肉瘤病毒转化的细胞培养基中分离出来,故名。可分为五大类,目前研究的较为清楚的是TGF-α和TGF-β。TGF-α与EGF在氨基酸序列方面有33%~44%同源,可与EGF受体结合而发挥作用,其与EGF受体结合,激活酪氨酸激酶,最终引起细胞分裂。Cribbs等[7]通过原位杂交检测创面TGF-αmRNA的水平,来反映创面愈合的能力。TGF-β是与创伤愈合关系最密切的生长因子,几乎影响到愈合的各个时相[8]。TGF-β能够诱导细胞外基质的产生、沉积,增加细胞间的基质粘附,促进细胞的增殖、迁移、分化,加速肉芽组织的形成。Kishi等[9]在培养的鼠皮肤成纤维细胞中,加入外源性TGF-β1,证明其可促进胶原、粘多糖的合成和细胞增殖。
5.血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)。VEGF作为上调血管生成的重要因子,能特异性地直接作用于血管内皮细胞,诱导血管内皮细胞增殖、迁徙及血管腔形成,进而导致新生血管的生成。VEGF还可明显增加血管的通透性,进而促进血浆蛋白在细胞外基质中沉积,为成纤维细胞和血管内皮细胞长入提供临时基质。有文献报告[10]认为,VEGF是通过上调内皮细胞中eNOS的合成,致NO含量增加而发挥其生物活性的。Street等[11]研究证明,VEGF可通过促进血管生成和骨的代谢而加速骨折愈合。
6.细胞因子(cytokines)。细胞因子也是生长因子,主要包括白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子(tumournecrosisfactor,TNF)。细胞因子以网络的形式分布并发挥着各自的作用。IL-1是由巨噬细胞分泌的多肽类生长因子,能促进炎症蛋白和炎症介质的释放,还可诱导内皮细胞表达内皮粘附分子;IL-6主要作为前炎症物质,在激活宿主局部防御机制的同时,也直接影响纤维细胞与内皮细胞的生长。Cole等[12]采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbertassay,ELISA)测定了鼠角膜损伤后IL-6的含量,原位杂交检测了IL-6mRNA的表达;TNF能刺激纤维母细胞的增殖及胶原合成,并能刺激血管再生。Herzog等[13]经研究表明,硫酸锌造成鼠嗅球损伤后,外源性TGF-α、EGF和bFGF均能够促进嗅神经元的再生和神经支配的修复。
【细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)】创面愈合过程中,迁移增生的平滑肌细胞和成纤维细胞,分泌的细胞外基质起到重要作用,它可以为细胞提供移动的网络和向导,把细胞粘附在一起,对组织的愈合起到骨架作用,并且影响各种生长因子生物活性及其调节作用。
1.胶原蛋白(collagen)。胶原蛋白有10余种,比较重要的是Ⅰ型和Ⅲ型胶原。胶原蛋白赋予ECM抗牵拉张力,能使血管保持稳定的结构和张力,为多种生长因子和细胞参与创伤反应提供重要场所,对细胞的生长、分化、粘附及迁移有明显影响。胶原中含有羟脯氨酸,可通过测定羟脯氨酸含量间接了解胶原蛋白含量。Meltem等[14]采用改进的氯胺T氧化法测定组织中羟脯氨酸含量,研究胶原蛋白在创伤愈合中的作用。
2.粘连糖蛋白(adhesiveglycoproteins)。包括纤维连接蛋白(firbronectin,FN)及层粘连蛋白(laminin,LN)等。FN是创伤愈合中的“多功能分子”。作为趋化因子,它对单核细胞、中性粒细胞和成纤维细胞都有化学趋化作用,刺激细胞向创面移动;作为粘附分子,它能粘附成纤维细胞、单核巨噬细胞于各种间质中;作为调理因子,它能与细菌和组织碎片等特异性结合而招引吞噬细胞的净化;作为细胞运动的基质,它参与基质的产生和组装,构成表皮细胞增生和爬行的骨架[15]。FN与细胞间的相互作用可能由整合素、其他受体或FN的疏水区嵌入细胞磷脂双分子层的疏水链中所致[16]。LN主要存在于基底膜的透明层,它可将细胞牢固地连接在基底膜上,又可使基底膜中的成份互相连接,维持组织结构的稳定性,并且可促进细胞粘附和分化,抑制迁移。
3.蛋白多糖(proteoglycans)。蛋白多糖是构成ECM的主要成份,它能调节细胞增生、粘附、移行等,控制ECM沉积,将多种细胞连接在一起,对维持组织弹性有重要作用。
4.角质细胞胶原酶-1。ECM的产生与降解对组织塑形是必需的,包括胶原酶-1在内的金属基质蛋白酶能有效降解细胞外基质成份,为愈合创造良好的条件。皮肤受到损伤后,创面角质细胞快速表达胶原酶-1,并在愈合期间持续存在,直至完全上皮化后才停止。因此,Pilcher等[17]通过ELISA测定创面胶原酶-1的含量,来评价创面愈合能力。
【创伤愈合与鼻内镜手术】自从奥地利格拉茨大学Messerklinger教授(70年代初)提出“鼻内镜鼻窦外科”以来,鼻内镜在临床上的应用迅速普及。鼻内镜手术作为治疗慢性鼻窦炎、鼻息肉的有效手段,以恢复鼻腔鼻窦粘膜形态和功能为最终目的,因此,了解术后鼻腔鼻窦粘膜的愈合情况,是判断手术疗效的关键。手术后上皮再生就是创伤愈合的过程。Hansson等[18]研究说明人鼻粘膜受到损伤后,再生的细胞胞质中生长因子的含量明显增加,几乎所有的鼻粘膜细胞都分泌多肽生长因子,参与这一修复过程。Watelet等[19]指出鼻粘膜的创伤修复过程涉及PDGF、FGF、EGF、TNF等多种生长因子和胶原蛋白、FN、金属基质蛋白酶等多种细胞外基质,共同调节粘膜上皮的创伤修复过程。因此,可以通过测定创面各种生长因子和细胞外基质含量的高低,来评估创面愈合的能力,对鼻粘膜恢复情况作出客观判断。Watelet等[8]应用ELISA对8例鼻内镜术后病人和13例对照者,鼻分泌液中TGF-β1、TGF-β2、EGF和PDGF的含量进行了测定,研究鼻粘膜创伤愈合的动态变化。此法准确、可靠,操作方便,病人无痛苦,可动态观察鼻粘膜愈合情况,对完善治疗,提高手术治愈率有重大意义。但如何将细胞外基质含量的测定与生长因子的测定联合起来,如何选择最佳组合指标,对鼻内镜术后粘膜的愈合好坏进行评估,还有待于进一步研究。
参考文献
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[3]PiazueloE,JimenezP,LanasA,etal.Platelet-derivedgrowthfactorandepidermalgrowthfactorplayamajorroleinhumancolonicfibroblastrepairactivities[J].EurSurgRes,2000,32(3):191-196.
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[19]WateletJB,BachertC,GevaertP,etal.Woundhealingofthenasalandparanasalmucosa:areview.AmJRhinol,2002,16(2):77-84.
[作者]AnnHoeben,BartLanduyt,MartinS.Highley,HansWildiers,AllanT.VanOosterom,andErnstA.DeBruijn
[杂志]PharmacolRev200456:549-580.
Angiogenesisisahallmarkofwoundhealing,themenstrualcycle,cancer,andvariousischemicandinflammatorydiseases.Arichvarietyofpro-andantiangiogenicmoleculeshavealreadybeendiscovered.Vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)isaninterestinginducerofangiogenesisandlymphangiogenesis,becauseitisahighlyspecificmitogenforendothelialcells.Signaltransductioninvolvesbindingtotyrosinekinasereceptorsandresultsinendothelialcellproliferation,migration,andnewvesselformation.Inthisarticle,theroleofVEGFinphysiologicalandpathologicalprocessesisreviewed.WealsodiscusshowmodulationofVEGFexpressioncreatesnewtherapeuticpossibilitiesanddescriberecentdevelopmentsinthisfield.
血管内皮生长因子(VEGF)与血管生成
血管生成是创伤治愈、月经周期、肿瘤、各种局部缺血和炎症疾病的共同特征。现已发现许多抗血管生成素分子和前体。血管内皮生长因子是血管生成和淋巴血管生成的诱导因子,它是一种对内皮细胞高度特异的促细胞分裂剂。信号转导包括酪氨酸激酶受体的结合和内皮细胞的增殖、移动,以及新的血管形成。本文重点评述了血管内皮生长因子在正常成人中的生理作用(如月经周期),以及在肿瘤、炎症等疾病的病理进程中的作用。探讨通过调控血管内皮生长因子的表达来创造新治疗途径的可能性,并综述了这一领域最近的发展情况。
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生长因子虽是一种重要的营养要素,但它与碳源、氮源和能源不同,并非任何一种微生物都须从外界吸收的。各种微生物与生长因子的关系可分以下几类:
(1)生长因子自养型微生物(auxoautotrophs) 多数真菌、放线菌和不少细菌,如E.coli(大肠杆菌)等都是不需要外界提供生长因子的生长因子自养型微生物。
(2)生长因子异养型微生物(auxoheterotrophs) 它们需要多种生长因子,如乳酸细菌、各种动物致病菌、原生动物和支原体等。例如,一般的乳酸菌都需要多种维生素;许多微生物及其营养缺陷型(突变株)都需要不同的嘌呤、嘧啶碱基;Haemophilusinfluenzae(流感嗜血杆菌)需要卟啉及其衍生物作为其生长因子;支原体常需要甾醇;Haemophilusparahaemolyti-cus(副溶血嗜血菌)需要胺类;一些瘤胃微生物需要C4~C6分枝或直链脂肪酸;某些厌氧菌如Bacteroidesmelaninogenicus(产黑素拟杆菌)需要维生素K和氯高铁血红素,等等。
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