皮质醇放射免疫试剂
预期用途：
用于体外诊断。
该药盒定量检测血清、血浆及尿液中皮纸醇的水平。
摘要：
皮质醇是肾上腺皮质分泌的最主要的糖皮质激素，其生理效应为抗炎症活
性，维持血压和由蛋白合成糖的过程。
糖皮质激素在促肾上腺皮质激素（ACTH）的刺激下合成。ACTH由垂体前
叶分泌。在一般个体中，ACTH存在时，皮质醇通过下丘脑-垂体-肾上腺皮质这
个轴线（HPA轴线）参与一个负反馈循环，而垂体ACTH是受下丘脑分泌的ACTH
释放因子（CRF）调控的，下丘脑CRF受皮质醇水平的影响产生应激。生理及
心理上的应激，昼夜变化和低血糖又影响着皮质醇的分泌速度。
HPA轴上每个器官出现问题都会导致皮质醇水平发生变化，用血清或血浆
中皮质醇的水平来衡量肾上腺功能状况有助于常规和非常规诊断。早晚检测与刺
激和抑制试验结合起来可为特殊的肾上腺疾病诊断提供有利依据。阿狄森氏病
（慢性肾上腺皮质机能减退症）以及柯兴氏综合症（肾上腺皮质分泌过盛）的诊
断就是循环中皮质醇水平的特异分析有助于诊断的两个例子。
方法原理：
该方法以放射免疫测定的竞争性结合原理为基础。标准品和未知样品包被管
中一起温育，抗体包被于试管底部。温育后将管内物质吸出或倒出，计数。在1～
60μg/dl范围内，以5个血清标准坐标准曲线，未知样品值可从标准曲线中查得。
整个反应在包被管中进行。对于血清，尿液或血浆样本来说，未分离样本的稀释，
蛋白质的变性或提取步骤是必须的。
除了非提取尿皮质醇分析外，该药盒也可用于尿液中游离皮质醇的测定。首
先用亚甲基氯化物提取尿液中皮质醇，将提取物的一个等份式样在包被管中直接
脱水（试验证明如果使用优质的亚甲基氯化物，不会有损于包被管）。为确保样
本中含有适当水平的蛋白质，向每个包被管中加入10μl皮质醇血清空白，其余
测定过程同血清，血浆和非提取尿皮脂醇。应监控使用亚甲基氯化物提取尿中皮
)
质醇的效率。
试剂：
规格：CA-1529-100T
CA-1549-500T
缓冲液的介绍看试剂制备部分。所有试剂（包括缓冲液）在2～8℃下贮存，
保质期内是稳定的。包被管可贮存在2~27℃，不要使用过期试剂。每一药盒的
组分首先指的是100T，然后指的是500T。
1.125I皮质醇标记物
Cat.No.CA-2649
每盒1瓶/5瓶
每瓶有10ml磷酸盐缓冲液，内含大约4μCi标记物（<1μg/ml 皮质醇）,
以0.1%爹氮化钠作为防腐剂的ANS（8-Anilino-1-萘磺酸）。
2.兔抗皮质醇血清包被管
Cat.No.CA-2167
每盒100T/500T
12×75mm包被管，并用一塑料包包装。
3.PBS缓冲液
Cat.No.CA-2715
每盒1/5
每小瓶含有100ml磷酸盐缓冲液，0.1%叠氮化钠作为防腐剂。
4.皮质醇血清空白
Cat.No.CA-236
每小瓶含1ml处理过的人血清，0.1%叠氮化钠作为防腐剂。
5.皮质醇血清标准
Cat.No.CA-2358，CA-2359，CA-2370，CA-2371，CA-2372
每盒1/5
每小瓶有1ml处理过的血清，内含皮质醇，0.1%叠氮化钠作为防腐剂，所
供标准品浓度如下：分别为1、3、10、25和60μg/dl
6.备用标签
每盒1/5
7.可选
半对数绘图纸
每盒50张。
警告和预防措施
用于体外诊断
不适于人和动物外服或内用。
潜在传染源的处理：
在制备本产品中所使用的每一血清和血浆捐献者单位，均已采用FDA提供
的方法测试过，发现对存在的HbsAg，HCV抗体和HIV抗体均无反应。尽管这
些方法具有高度的准确性，但也无法保证能发现所有的感染单位。本产品仍可能
含有其他能通过测试的人源物质。因此，没有已知的测定方法可以给出满意的保
证（既保证不存在乙肝病毒，丙肝病毒和HIV病毒或其他传染因素），因而其
使用和运输必须在良好的实验规程和适当的防卫措施下，按照国家相关政策进
行。
含叠氮化钠的试剂：
警告：本药盒中部分试剂含有叠氮化钠，叠氮化钠可与含铜、铅的装置反应
形成易爆炸的金属叠氮化物，其处理是冲入大量的水以防止叠氮化物的积聚，更
进一步的资料参阅“DecontaminationofLaboratorySinktoRemoveAzideSalts”
含125I的试剂：
此试剂含有放射性物质，其运输和使用应在适当的防护措施及良好的实验规
程下进行。
1其贮存应被限制在特定地点
2对其接近限定为被授权本人
3禁止用嘴吸取放射性物质
4禁止在指定放射性工作地点吃饭或饮水
5擦净可能发生溢出的地方，再用碱性去污剂或放射性去污溶液清洗。任何
使用过的玻璃器具在清洗其它实验室玻璃器具前，必须用清水彻底清洗干净。
领取从事放射性的实验人员或机构应持有的特定许可证
警告：此产品含有加利福尼亚州所知的致癌物
注意：印于包装上的放射性与印于盒子标签及标记物小瓶标签上的放射性有
轻微区别。盒子标签和标记物小瓶标签表明校准日起的准确放射性数量，而包
装上表明的是试剂盒的理论放射性数量。
试剂的配制：
将小瓶内的标记物加入到1瓶磷酸盐缓冲液中，充分混匀后，用混合液冲洗
标记物瓶以最大限度的转移标记物。将混合液装入易识别的容器中，贴上备用标
签，将其置于黑暗中保存或用金属箔包裹，温度控制在2~8℃。
样品要求：
样品的收集和处理：
血浆样本：
静脉取血放在含有肝素或DETA的试管中，分理处小分血浆，2~8℃冷藏可过
夜，长时间则学–20℃冻存。避免使用溶血、脂血和黄疸性血样。
血清样本：
尽管皮质醇检测通常指定使用血浆样本，但也可使用血清样本获得相似结果。
静脉取血放在试管中，不用任何添加剂。分离出血清部分，2~8℃冷藏可过夜
长时间则学–20℃冻存。避免使用溶血、脂血和黄疸性血样。
尿样：
收集24小时尿样，记下尿的容量，每升尿添加10克硼酸作为防腐剂，充分混
匀后–20℃冻存。使用前，室温融化样本并充分混匀。
检测过程：
成功使用该药盒，必须完全理解该部分内容，严格按照文中所述，仔细操作
实验每一步以获得可靠结果。药盒各部分都作为整体单位使用。许多部分单个测
定不能混用。不能使用过期药盒。每一次检测都必须做一条标准曲线。
未提供需自备的材料：
1.恒温水浴锅，37±2℃
2.10μl精确吸管
3.1.0ml半自动吸管
4.γ-计数仪
5.检测用试管架
6.抽水器（可选）
7.涡旋混匀器
8.吸纸（可选）
尿样检测时使用的材料：
1.随时可用的玻璃试管（12×75mm）和试管帽
2.二氯甲烷（二氯甲；美国化学学会分析试剂等级）
3.冰壶
4.100μl、200μl精确吸管
5.通风橱或通风良好的工作区
6.蒸发二氯甲烷，其意义在于产生一股干燥的空气或氮气是提取物缓缓升温
至37℃
尿样提取过程
该过程包括监测二氯甲烷抽取效率的方法。在INCSTAR实验室里，典型
的尿样中回收皮质醇为99±14%
1.在冰壶里放一个适当的二氯甲烷容器使之冷却，每管许可放1ml。冰壶应
足够大以容纳二氯甲烷的烧杯和提取血样试管的架子
2.为检测提取效率，用病人的标签给每个试管做标记，一管标上“S”（样本），
另一管标上“E”（提取效率）
3.分别向“S”管和“E”管加入200μL24小时尿样
4.只向”E”管加10μl浓度为60μg/ml24皮质醇血清标准CA-2372，震荡
试管架，混匀试剂或每管单独混匀。
5.向各个“S”管和“E”管加上1ml冷却的二氯甲烷，充分涡旋混匀，提
取皮质醇到有机层，盖上帽或放在冰壶里以避免二氯甲烷过渡蒸发，为更
好的用吸管转移乙氯甲烷，在转移前，用冷的二氯甲烷清洗试管3~4次
6.等待分离的这段时间里，给每个“S”管和“E”管标记好两个皮质醇包
被管.
7.分离阶段后，仔细小心的从每管有机层（二氯甲烷）底部吸取100μl并
加到标记好的包被管中，吸取样本前，用冷的二氯甲烷冲洗吸管头，将吸
管头样本的渗出量减到最小，转移100μl提取液时，不要试图擦拭吸管
头，否则会因二氯甲烷的特性会引起吸管头部溶液产生气泡
小心的向包被管转移提取液，用一只手抓住包被管和提取管，快速小心的
吸取100μl至包被管的底部
8.伴随着一股干燥的空气和氮气，二氯甲烷从包被管底部蒸发，提取物缓缓
升温至37℃
警告：工作区避免过多雾状卤化烃产生
提取只能在通风处或通风良好的工作区进行
9.二氯甲烷蒸发后，向每个带有病人样本的包被管（“S”管和“E”）加入
10μl皮质醇血清空白，CA-2367,以使每个样本都包括适当水平的蛋白质
10.有检测过程的第一步继续放免操作
检测过程：
包括绘制标准曲线，从曲线上可查得未知样本皮质醇的含量
1.将所有试剂恢复到室温，使用前充分混匀.，不可有气泡产生
2.将标记好的包被管按如下所述安置。总管（T1,T2）和B0管（1，2）对
于确凿的数据变化和质控程序是必需的，但如果在半对数绘图纸上作标
准曲线，二则是可省略的
3.加样至包被管底部
a.10μl皮质醇血清空白，或每个血清皮质醇标准
b.加10μl样本（血清、血浆和非提取尿样），仔细小心的吸取标准
样本。
c.对于提取尿样，使用包被管，管中含有经过9步尿提取操作而得的
提取尿
注：若要求稀释病人血清或血浆样本，药盒提供的皮质醇血清空白
可作稀释剂，提取和非提取尿样可用蒸馏水稀释，对于尿游离
皮质醇吸取200μl稀释尿样（尿提取过程步骤3），常规检测
继续进行，计算结果应将稀释因素考虑进去。
4.每管加入1.0ml标记-缓冲混合液，低速涡旋混匀。
5.水浴锅中37±2℃温育45分钟。
6.除总管外，吸出或倾析所有试管
若用抽吸技术，一定要将吸管的塑料头接触到包被管底部将液吸出
若用倾析技术，允许将试管倾倒3~5分钟排液，试管向上前在试纸上轻
呵试管，移出粘附液体。
7.所有管在γ-计数仪上计数1分钟（注意测的是125I）
8.计算、提交结果
插图略
标准：
本药盒中的皮脂醇标准都对照美国专利提及的皮脂醇标准进行了校
准。其他产品和过程都是以该标准作对照。
质控
每个实验室都应采用不同浓度的质控监控检测进行。质控品应按未知
样本来对待，保持质控记录。哥哥实验室都应确定自己的质控。
结果
未知血清、血浆和未知尿样可同时检测，用内插法从标准曲线上查出
结果，标准曲线由皮脂醇标准品绘制。非提取尿皮脂醇样本（UC）和提取尿
游离皮质醇样本（UFC）在用公式换算到“μg/24hr”
1.记录各管的每分钟计数（CPM）
2.皮质醇标准品计数为纵坐标，以相对应的皮脂醇浓度为横坐标，在半
对数绘图纸上制图
3.画出标准曲线，例子见表1和图1
4.确定每个样品各管计数在纵坐标上的位置，画一条水平横线与标准曲
线相交，在这个交点，读出相对应的横坐标上的皮脂醇浓度。（μg/dl）
非提取尿皮脂醇：
将非提取尿样的皮脂醇浓度（UC）从μg/dl换算到μg/24hr，使用如下公
式：
S×V
UC=———
100
S：非提取尿样浓度（μg/dl）
V：总尿容量（ml/24hr）
100：换算因子
提取尿游离皮质醇：
将UFC从μg/dl换算到μg/24hr，使用如下公式：
S×V
UFC=—————
33.3(E-S)
S：提取尿样浓度（μg/dl）
E：符合样效率管的浓度（μg/dl）
V：总尿容量（ml/24hr）
33.3：结合了稀释和提取因素的换算因子
对于每个实验室来说，都希望监控尿提取过程（EE）的效率，按下面公
式计算出效率的百分比
E-S
EE=———×100
6.0
S：提取尿样浓度（μg/dl）
E：符合样效率管的浓度（μg/dl）
6.0：“S”管和“E”管浓度间的预期差值
100：换算因子
单位
把血清标准品、质控和病人样本（血清和血浆）值乘以27.59（见表1所列
皮质醇标准的两种单位值），使用362.5道尔顿分子量，从μg/dl换算到国际单
位nmol/ml。同样，提取和非提取尿质控和病人值乘以2.76，将μg/24hr换算到
国际单位nmol/24hr.
过程的局限性
过程中
标记-缓冲混合液必须避光保存。包被管又接收至使用前应2~7℃保存，保存未
用管时应将塑料包装安全的封闭好，以防止冷凝现象。
温育条件应按照程序检查，水域锅温度必须保持在37±2℃，而且水面要高于试
管内溶液，但不可淹没试管。
操作者应注意到错误结果可能由不正确贮藏和处理样本所致，避免使用溶血、脂
血和黄疸性血样。
未能获得正确的质控皮质醇浓度意味着操作不精确、处理不当或试剂变质。每次
检测都要作质控，每次检测都要绘制标准曲线。
本药盒不能用于测定正在用氢化泼尼松治疗的病人的血清（参见阐述）
阐述
总的来说，皮质醇水平上午5~10点最高，下午8点至凌晨4点最低。上午水平
通常是下午水平的1/2或1/3。女性一天中皮质醇水平的变化，摄入食物时升高
而丧失食物时显著减少，这一点已有所描述。昼夜变化，刺激和抑制试验、各种
压力都会使皮质醇浓度发生变化，例如：甲状旁腺激素刺激会使皮质醇浓度升至
上午水平的2~3倍。甲毗酮或地塞米松抑制会使上午水平不超过5μg/dl。雌激
素作为口服避孕药会引起血浆或血清蛋白中皮质醇水平升高。因此，每个病人的
皮质醇值以他/她上午皮质醇水平为准。
正常参数值
血浆或血清水平
早晨：7~25μg/dl获70~250ng/ml(193~690nmol/ml)
晚上：2~9μg/dl获20~90ng/ml(55~248nmol/ml)
在每个实验室确立自己的正常范围前，这些范围作指导用。
非提取尿皮质醇：
非提取尿样的尿皮质醇的正常范围为75~270μg/24hr（207~745nmol/24hr）。尿
样收集不当可导致错误的病人结果，建议测定肌酸酐以鉴别尿样收集是否合适。
提取尿样游离皮质醇
尿游离皮质醇的正常范围为20~80μg/24hr皮质醇（55~248nmol/24hr）。尿样收
集不当可导致错误的病人结果，建议测定肌酸酐以鉴别尿样收集是否合适。
灵敏度：最低可测浓度为0.21μg/dl
亲和力：皮质醇抗血清的亲和常数近似为2×108liter/mol
特异性：如下化合物使用皮质醇放射免疫法测定其交叉反应，是皮质醇浓度恰
为抑制50%时，比较各类混合物的交叉反应。
化合物%交叉反应
皮质醇100
泼尼松77
6-甲强的松龙43
11-脱氧皮质醇6.3
17-烃孕酮1.2
皮质酮<0.4
地塞米松0.2
氢化泼尼松0.2
脱氢皮质酮0.1
四氢皮质酮0.1
醛固酮<0.1
可的松<0.1
双氢皮质酮<0.1
孕酮<0.1
四氢皮质酮<0.1
6-β-皮质醇<0.1