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危险与可操作性分析研究_图文_
来自 : mayitao
CCC-HEH-2细胞。上海斯信生物公司细胞近3000种,来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制,在中国大陆努力搭建正牌细胞与国内广大科研人员之间的沟通桥梁。为您CCC-HEH-2细胞外,还有更多相关实验产品,标准品细胞株和实验技术服务等等前期后续服务。市面上的CCC-HEH-2细胞“李鬼”细胞荼毒科研,科学家指出被污染细胞系使生物医学遭受严重损失,细胞的身份至关重要。二、购买上海斯信生物CCC-HEH-2细胞注意事项--(斯信生物)发布2.1客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到CCC-HEH-2细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。2.2如为悬浮细胞,吸出培养液,1000转/分钟离心5分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。注意:换液时一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。2.3细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?(1)细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、破损、漏液等,重发;(2)冻存的细胞复苏后,绝大多数细胞未存活,重发;(3)存活的细胞静置24小时后,绝大多数细胞未存活,重发;(4)冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封,出现污染,重发;(5)视具体情况而定。2.4细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?(1)客户造成细胞污染,不重发;(2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;(3)细胞状态不好,未细胞培养前3天照片的,不重发;(4)细胞培养时经其它处理的,不重发;(5)细胞收到2天内,未告知,不重发;(6)视具体情况而定。三、原代【CCC-HEH-2细胞】培养之扫雷行动错误1:一小管原代CCC-HEH-2细胞在水浴中解冻一段时间纠正1:原代CCC-HEH-2细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。错误2:解冻match小瓶后直接离心原代CCC-HEH-2细胞纠正2:我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。错误3:允许原代细胞变得过于融合纠正3:当生长至100%汇合时,原代细胞可以变得衰老。记住,原代细胞不是100%纯,因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时,对原代细胞进行传代培养。错误4:传代原代CCC-HEH-2细胞时过度胰蛋白酶消化纠正4:当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。错误5:原代CCC-HEH-2细胞可以很容易地重新冻存纠正5:通常我们不推荐重新冻存原代CCC-HEH-2细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。错误6:原代CCC-HEH-2细胞可以无限的增殖纠正6:与细胞系不同,原代CCC-HEH-2细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外,如果你正在使用一个增值困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。错误纠正后就该步入正轨啦——应如何进行冻存细胞的培养?下列步骤以单管冻存细胞进行培养的实验方案为例。●准备一烧杯37°C的水。●从液氮储存中取出一管细胞,注意保护手和眼睛。●拧松管盖1/4圈,等待10秒钟以释放螺纹中可能残留的液氮,再重新拧紧管盖。●将冻存管的下半部分置于37°C水浴中进行解冻,直至冻存管内仅剩余一小块冰芯,使细胞迅速解冻。●用消毒液擦拭管体外表面,再将其移至II级A型层流细胞培养通风橱中。●打开管盖,使用1mL移液上下吹打细胞悬液以分散细胞。●从管中吸取20uL细胞悬液,并将其稀释于20uL台盼蓝溶液中(如:Gibco?台盼蓝,货号15250-061)。●使用血细胞计数板来确定每毫升悬液中的活细胞数。●将管中悬液(1mL)稀释至产品说明中的推荐浓度(例如1.25x10E4活细胞/毫升,Gibco?新生人表皮角质形成细胞)。●将5mL细胞悬液加入25cm2培养瓶,或将15mL细胞悬浮液加入75cm2培养瓶中。●摇匀培养瓶中的培养基以分散细胞。许多类型的细胞都会迅速贴壁,如果没有在传代后即刻摇匀细胞,细胞可能生长不均匀。●在37°C、5%CO2/95%空气、湿度细胞培养箱中培养细胞。为了获得结果,培养开始后至少在24小时之内不要扰动细胞。是否可以对扩增后的CCC-HEH-2细胞重新冻存?如果可以该如何操作?当从斯信购买了冻存或正处于增殖期的细胞,可对其进行扩增和重新冻存。不过,冻存操作可能会对细胞的生长状态有所影响。下列实验方案为大家提供了一份培养基冻存细胞的基础指南。请注意:由于冻存设备与个人技术之间的差异,我们无法确保使用本方案冻存的细胞在复苏后能够保持活力,我们也无法为研究用户实验室冻存细胞的效果进行担保。●使用37°C水浴化冻培养基或4°C条件下过一个晚上进行化冻。●如果在水浴中进行化冻,请确保温度不要超过37°C,也勿将该产品延长时间置于37°C。●培养基在使用前应置于4°C条件下平衡。为获得结果,推荐大家使用能够控制变温速率的冰箱。如果缺少能够控制变温速率的冰箱,也可使用细胞冻存盒。●如需用酶试剂解离培养器皿表面的细胞,则需使用对应的终止溶液重悬细胞以中和酶的效果。●通过离心沉淀CCC-HEH-2细胞。●去除上清液后,使用预冷的培养基以5x10E5至3x10E6细胞/毫升的密度重悬细胞。●将细胞悬液分装至合适数量的冻存管中。●将细胞尽快冷却至4°C。●如果使用控制变温速率的冰箱:以每分钟降低1°C的速率冰冻样品,直至–40°C。之后按照每分钟降低2°C的速率降至–90°C左右。●如果使用细胞冻存盒:请按照说明书来准备冻存盒。●为获得结果,推荐大家在细胞温度降至–80°C后,尽快将冻存管转移至液氮储存设备的气相中。●作为培养基的替代品,可使用该冻存细胞推荐的基础培养基,添加10%胎牛血清(FBS)和10%DMSO进行细胞冻存。请注意不推荐将培养基用于人表皮黑素细胞的冻存操作。斯信生物科技实验室温馨提醒:组织块贴壁法分离细胞时:注意组织块贴壁2-3h后,补液时沿壁轻轻加入培养基,防止组织块漂浮。关于细胞培养还有很多问题需要解答,怎么办?欢迎咨询,为你排忧解难!四、CCC-HEH-2细胞售后服务政策Acris、abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&Dmillipore、BD、QiagenCayman、JacksonLife、GeneTex、Bio-RadDSHB、tocris、peprotech等品牌;部分产品现货,超低比价,另常备、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常备现货;货期短,价格优,售后齐全。CCC-HEH-2细胞污染问题,请在收到产品48小时内,给我们提出真实的实验结果;细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,我们调查核实后予免费调换,不收取任何费用。需要客户CCC-HEH-2细胞细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表。如用户收到细胞8-30天之内,因处理不当造成细胞死亡或污染,我公司将优惠价重新一株原细胞CCC-HEH-2细胞质量可靠,售后有保障★我库细胞近3000种,来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制。冻存细胞时间为5-7个工作日,活细胞为7-15个工作日。★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解CCC-HEH-2细胞相关细胞价格及详细资料请老师告诉我们,对您造成的不便还请见谅!(BYWHY)
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