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病毒中和实验一固定抗血清-稀释病毒法

(以细胞培养为例):①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);

 

②取 0. 6ml不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 标准的抗病毒血清混合;

 

③再取 0.6ml 不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 已知的阴性血清混合;

 

④将混合液置 37℃ 水浴1h, 然后取 0. 2 ml 混合液分别接种于细胞已长成单层的 96孔细胞培养板中,每一稀释度接种 5孔,设 5 孔正常细胞对照;

 

⑤将细胞培养板置 37℃ 、 5% CO2 温箱中孵育,每日观察细胞病变效应 (CPE) 。

 

⑥中和试验的病毒 CCID50 的计算:细胞培养中,通常是以病毒的组织半数感染量 (CCID50/单位体积)作为中和反应的终点。而动物试验中,用动物半数致死量 (LD50/单位体积)作为中和反应的终点。中和试验中,抗血清组的 CCID50 与阴性血清组的 CCID50 之差的对数等于或大于2, 才能说明中和试验结果为阳性。